浓香型白酒酒醅中总RNA提取方法评价

为探寻我国特有的复杂微生态环境——浓香型酒醅样品总RNA提取方法，本实验建立了一种改良的十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate，SDS）-苯酚法，并从提取成本及耗时、RNA质量浓度和纯度、电泳结果、反转录效果及高通量测序分析5 个方面，比较其与试剂盒法、Trizol法、十六烷基三甲基溴化铵（hexadecyl trimethyl ammonium bromide，CTAB）法和月桂酸钠法提取酒醅样品总RNA的效果。结果表明，SDS-苯酚法和CTAB法成本较低，试剂盒法成本最高但耗时最短；试剂盒法提取的总RNA质量浓度最高，分别约为SDS-苯酚法、Trizol法、CTAB法和月桂酸钠法的1.84、2.33、19.14 倍和3.09 倍；SDS-苯酚法和试剂盒法提取样品总RNA的OD260 nm/OD280 nm和OD260 nm/OD230 nm均分别大于1.8和2.0；SDS-苯酚法电泳条带完整性优于其他方法，CTAB法无法检测到电泳条带。SDS-苯酚法、试剂盒法和Trizol法所提取的RNA能有效反转录为cDNA并将其用于高通量测序分析，3 种方法所得优势微生物种属（Lactobacillus和Clostridium）及不同发酵节点酒醅之间的微生物群丰度变化情况基本一致，其中SDS-苯酚法获得的微生物群落多样性最高，且能较好地反映不同酒醅间微生物类群的差异；Trizol法和试剂盒法均能偏好性地多获得1 个属，但其含量均很低（0.01%）。本研究系统地比较了5 种常见的总RNA提取方法在浓香型酒醅RNA提取的应用效果，其中本研究建立的改良SDS-苯酚法具有一定的综合优势，为今后以RNA为基础的酒醅分子生物学研究提供理论依据，同时对其他富含糖、腐殖质及酚类等杂质的环境样品RNA提取具有较好的借鉴意义。

Comparative Assessment of Modified Sodium Dodecyl Sulfate-Phenol Method and Other Methods for Total RNA Extraction from Fermented Grains of Chinese Strong-Flavor Baijiu