转基因小麦外源基因插入位点初步分析及检测方法的建立

利用染色体步移(genome-walking)原理和巢式PCR方法,对转基因小麦外源基因sGNA插入位点的序列特征进行了分析,并以此建立了sGNA基因转化事件特异性检测的方法。根据sGNA基因的核苷酸序列设计特异引物,利用Takara公司提供的简并随机引物,通过染色体步移法扩增到了转sGNA基因株系zy2-18的插入位点的边界序列,分析得到的边界序列可知,外源基因片段是通过部分同源重组的方式与小麦基因组进行整合的,整合位点位于A染色体组。检测结果显示携带外源基因sGNA的质粒在与小麦基因组整合的过程中发生了剪切,且Ubi启动子与bar基因被切除,保留了两个串联的NOS基因,且在4500~4520 bp区间发生了重组后的缺失,而在4786~4810 bp区间有一段碱基序列插入,导致插入区段的小麦基因组序列发生重排,初步分析外源基因是通过同源重组的方式进行整合的。通过验证,证明了插入位点信息的准确性,并初步判断插入位点位于小麦A染色体组。因此,随机引物法genome-walking可以作为转基因小麦安全检测及身份识别的有效方法。