双孢蘑菇中AbbHLH的表达、纯化及多克隆抗体制备

碱性螺旋-环-螺旋（basic helix-loop-helix，bHLH）转录因子在真核生物中广泛存在，是数量较多的转录因子家族之一。该文首次克隆并鉴定双孢蘑菇中的一个AbbHLH（Agaricus bisporus basic helix-loop-helix）转录因子，建立原核表达载体pET-28a（+）-AbbHLH并将其转至E.coli BL21（DE3）感受态细胞中诱导表达，得到主要以包涵体形式存在的6×His-AbbHLH重组蛋白，经纯化与复性后得到纯度超过80%的抗原蛋白。用制备的抗原蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，间接酶联免疫吸附测定法测定结果表明抗体血清的效价可达102 400。将抗体血清依次经Protein A及CNBr亲和纯化后，用Western Blotting检测抗体特异性，结果表明该抗体能够特异性识别双孢蘑菇中的AbbHLH蛋白。