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| 毕赤酵母甲酸脱氢酶辅因子特异性改造及应用 | |
| 作者姓名： | 胡力元 刘璐瑶 白仲虎 杨艳坤 金坚 |
| 作者单位： | 1. 工业生物技术教育部重点实验室(江南大学);2. 粮食发酵与食品生物制造国家工程研究中心(江南大学);3. 江苏省生物活性制品加工工程技术研究中心;4. 江南大学生命科学与健康工程学院 |
| 基金项目： | 国家重点研发计划项目(2021YFC2100203); |
| 摘 要： | 甲酸脱氢酶(formate dehydrogenase, FDH, EC 1.2.1.2)在发酵工业中常被应用于酶法辅因子再生系统。为了改造巴斯德毕赤酵母甲酸脱氢酶(FDH from Komagataella phaffii,KphFDH)的辅因子特异性并应用于体外NADPH辅因子再生系统,研究基于多序列比对和文献调研的结果,确定了D195、Y196为突变位点,构建了16个突变体,并表征了野生型和突变体的比酶活力和酶促反应动力学。得到最优的NADP+特异性突变体为KphFDHD195Q/Y196R,其对NADP+的催化效率(kcat/Km)为1.967 L/(mmol·s),催化特异性比率[(kcat/KmNADP+)/(kcat/KmNAD+)]为36.426;以NADP+作为辅因子时,对甲酸的催化效率(kcat<... |
| 关 键 词： | 辅因子再生系统 巴斯德毕赤酵母 甲酸脱氢酶 酶促反应动力学 还原胺化反应 NADPH再生 |