重组降血压肽ACEIP的表达及活性鉴定

选择降血压肽WQVLPNAVPAK，人工合成大肠杆菌密码子优化后六串联体血管紧张素转换酶抑制肽(angiotensin I-converting enzyme inhibitory peptide,ACEIP)基因片段ACEIP，将其克隆至表达载体pET30a后构建重组质粒pET30a-ACEIP。该重组质粒经限制性内切酶Nde I和HindIII双酶切鉴定、菌落聚合酶链式反应鉴定后，将其化转至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中，构建了表达工程菌大肠杆菌BL21(DE3)/pET30a-ACEIP。工程菌经终浓度为0.8 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷导后，Tricine-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示在分子质量约为8.7 kDa处出现一条明显条带。经Ni²⁺亲和层析、肠激酶酶切后纯化得到串联多肽ACEIP。其中融合蛋白的表达量为61.30 mg/L，串联多肽ACEIP的表达量为57.84 mg/L。串联多肽经胰蛋白酶酶解后的IC₅₀值为6.39 mg/m L,ACE抑制活性高于单体肽WQVLPNAVPAK的抑制活性(I...