| 活的非可培养状态副溶血性弧菌实时荧光逆转录PCR检测方法的建立及其毒力研究 |
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| 引用本文： | 刘静宇,凌莉,邓翼惠,易敏英,胡科锋,陈碧玲.活的非可培养状态副溶血性弧菌实时荧光逆转录PCR检测方法的建立及其毒力研究[J].中国食品卫生杂志,2013,25(4):309-315. |
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| 作者姓名： | 刘静宇 凌莉 邓翼惠 易敏英 胡科锋 陈碧玲 |
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| 作者单位： | 1. 广东出入境检验检疫局技术中心,广东 广州,510623
2. 深圳市龙岗区平湖预防保健所,广东 深圳,518111 |
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| 基金项目： | 广东省科技计划项目，广东检验检疫局科技计划项目 |
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| 摘 要： | 目的 建立检测活的非可培养(VBNC)状态副溶血性弧菌的荧光逆转录PCR方法并研究其毒力基因表达.方法 将副溶血性弧菌AS079菌株添加到陈化海水中,4℃冰箱内培养,使其进入VBNC状态,针对其管家基因、鉴定基因和毒力基因分别设计实时荧光逆转录PCR引物,通过不同的PCR反应程序和引物浓度组合试验,摸索最佳反应体系条件,用于VBNC状态副溶血性弧菌的检测和毒力研究.结果 用所建立的检测VBNC状态副溶血性弧菌的实时荧光逆转录PCR方法,对接种于陈化海水培养的不同时期的AS079副溶血性弧菌进行荧光定量逆转录PCR扩增,结果显示,随着培养时间的延长,毒力基因tdh2和鉴定基因toxR表达水平持续下降,但即使细菌进入VBNC状态,这两个基因也能够得到很好的扩增,说明以toxR基因和tdh2基因对进入VBNC状态的副溶血性弧菌进行检测和毒力研究方法可行.灵敏度试验表明,鉴定基因toxR的最低检测限可达到48 cfu/ml,研究毒力基因tdh2的表达需要细菌浓度至少为4.8×102cfu/ml,同时试验证明此方法与其他相近食源性致病菌无交叉反应.结论 该实时荧光逆转录PCR方法检测快速、特异性强、敏感度高,适用于VBNC状态副溶血性弧菌的检测和毒力分析.
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| 关 键 词： | 副溶血性弧菌 活的非可培养 实时荧光逆转录PCR 毒力基因 食源性致病菌 |
| 收稿时间： | 2013/2/27 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2013/4/15 0:00:00 |
Determination and analysis of potential virulence of viable but nonculturable Vibrio parahaemolyticus |
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| LIU Jing-yu,LING Li,DENG Yi-hui,YI Min-ying,HU Ke-feng and CHEN Bi-ling.Determination and analysis of potential virulence of viable but nonculturable Vibrio parahaemolyticus[J].Chinese Journal of Food Hygiene,2013,25(4):309-315. |
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| Authors: | LIU Jing-yu LING Li DENG Yi-hui YI Min-ying HU Ke-feng and CHEN Bi-ling |
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| Affiliation: | GuangDong Inspection and Quarantine Technology Center,ShenZhen LongGang District PingHu Preventive Health Care Department,GuangDong Inspection and Quarantine Technology Center,GuangDong Inspection and Quarantine Technology Center,GuangDong Inspection and Quarantine Technology Center |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Vibrio parahaemolyticus viable but nonculturable state real time RT-PCR virulence gene food-borne pathogen |
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