| 拟除虫菊酯类农药单链可变区抗体的制备、 鉴定及其特异性分析 |
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| 引用本文： | 吴元元,金朵,付骋宇,祁志军. 拟除虫菊酯类农药单链可变区抗体的制备、 鉴定及其特异性分析[J]. 食品安全质量检测学报, 2017, 8(2): 386-393 |
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| 作者姓名： | 吴元元 金朵 付骋宇 祁志军 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学农药研究所,西北农林科技大学农药研究所,陕西省进出口检验检疫局,西北农林科技大学农药研究所 |
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| 基金项目： | 国家自然科学(30900955)、国家检验检疫总局科技项目(2014IK016). |
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| 摘 要： | 目的制备拟除虫菊酯类农药可溶性单链可变区(single-chain fragment variable,scFv)抗体,鉴定其免疫活性并对其特异性进行分析。方法构建表达载体pET28a(+)-scFv和pET42a(+)-scFv并转化BL21(DE3),重组菌经诱导后通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定目的蛋白的表达。可溶性融合蛋白scFv/GST经Glutathione Sepharose 4B纯化后用FactorXa切除GST标签获得scFv,然后采用Western blotting法对其进行鉴定。scFv对7种拟除虫菊酯类农药的特异性采用间接竞争酶联免疫法进行分析。结果经0.1mmol/LIPTG诱导后,重组菌BL21(DE3)-p ET28a(+)-scFv和BL21(DE3)-pET42a(+)-scFv表达的目标蛋白分别为包涵体抗体和部分可溶性抗体。经鉴定,可溶性scFv相对分子量约为30k Da,效价为1:25600。同源半抗原Hap1对单链抗体sc Fv的IC50为2.43μg/mL,检出限为0.045μg/mL;scFv抗体对氯菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯均有较高特异性,IC50分别为3.29、4.72和5.55μg/mL。结论本研究成功获得了拟除虫菊酯类农药的可溶性单链可变区抗体,该抗体对3种拟除虫菊酯农药具有很强的特异性,该研究可为拟除虫菊酯类农药多残留免疫分析提供依据。
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| 关 键 词： | 拟除虫菊酯类农药 单链可变区抗体 多残留免疫分析 |
| 收稿时间： | 2016-11-15 |
| 修稿时间： | 2016-12-21 |
Preparation, characterization and specificity analysis of single-chain fragment variable antibody against pyrethroid pesticides |
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| WU Yuan-Yuan,JIN Duo,FU Cheng-Yu and QI Zhi-Jun. Preparation, characterization and specificity analysis of single-chain fragment variable antibody against pyrethroid pesticides[J]. Journal of Food Safety & Quality, 2017, 8(2): 386-393 |
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| Authors: | WU Yuan-Yuan JIN Duo FU Cheng-Yu QI Zhi-Jun |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Pyrethroidpesticides Single chain variable fragment (scFv) Multi-residualimmunoassay |
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