产油真菌高山被孢霉中叶酸类化合物的提取及检测

二氢叶酸(FH_2)和四氢叶酸(FH_4)是重要的叶酸化合物,作为一碳基团的载体参与多种生物学反应。考察了不同破壁方法和纯化手段对叶酸类化合物提取的影响,优化了叶酸类化合物的色谱检测条件。结果表明:高山被孢霉经陶瓷珠机械研磨破壁,利用添加0.1%Vc和20 mmol/L醋酸铵的80%甲醇溶液进行萃取,最后用液相色谱进一步分离得到了FH_2和FH_4,并采用四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱对结果进行定性分析。色谱分析条件为采用TSK gel Amide-80(150mm×2.0 mm,2.0μm)色谱柱,采用5 mmol/L醋酸铵及乙腈作为流动相进行梯度洗脱,质谱选择离子扫描设为441.65 m/z和443.66 m/z。方法检测FH_2和FH_4的检出限分别为0.001μg/mL和0.002μg/mL,实验结果显示方法能快速并准确地检测叶酸类化合物,为解析叶酸代谢途径在脂质合成中的作用奠定基础。