多粘类芽孢杆菌适冷性新型β-半乳糖苷酶的重组表达和酶学性质 |
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作者姓名: | 向芷璇 关乐颖 李敬 闫巧娟 江正强 |
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作者单位: | 1. 中国农业大学食品科学与营养工程学院,中国轻工业食品生物工程重点实验室;2. 中国农业大学工学院 |
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基金项目: | 国家自然科学基金(32072163); |
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摘 要: | 目的:本实验旨在挖掘一个适冷性新型β-半乳糖苷酶,为低温生产低乳糖乳制品或合成低聚半乳糖(Galactooligosaccharides,GOS)提供基础。方法:从多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)基因组中克隆一个β-半乳糖苷酶(PpBgal42A)基因,构建重组表达质粒pET-28a-PpBgal42A在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,经亲和层析纯化后研究重组β-半乳糖苷酶的酶学性质,利用高效液相色谱检测各糖分浓度,以GOS转化率为指标,评价PpBgal42A的转糖苷能力。结果:PpBgal42A与酸热脂环酸芽孢杆菌(Alicyclobacillus acidocaldarius)来源的糖苷水解酶42家族β-半乳糖苷酶同源性最高,为59.9%。纯化后,PpBgal42A的比活力为163.7 U/mg,分子量约为79 kDa。其最适p H和温度分别为pH7.5和35℃,在pH7.0~9.5范围内和4~35℃以下保持稳定,50℃时快速失活,35℃时的半衰期为1777 min。PpBgal42A利用350 g/L乳糖于30℃反应6 h后合成GOS的转化率为31...
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关 键 词: | 多粘类芽孢杆菌 β-半乳糖苷酶 酶学性质 适冷性 低聚半乳糖 |
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