| 两种测定生物制品宿主细胞DNA残留量方法的建立 |
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| 引用本文： | 张培,胡倩,李盼盼,刘宾. 两种测定生物制品宿主细胞DNA残留量方法的建立[J]. 中国生物制品学杂志, 2019, 0(6) |
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| 作者姓名： | 张培 胡倩 李盼盼 刘宾 |
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| 作者单位： | 河南省食品药品审评查验中心;北京辅仁瑞辉生物医药研究院有限公司 |
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| 摘 要： | 目的建立特异性强、检测限低、准确度高的生物制品中宿主细胞DNA残留量的检测方法。方法通过优化,提高磁珠分离法和化学沉淀法提取样品中残留DNA的准确度,再利用Taqman探针法对样品和标准DNA进行定量PCR(quantitative PCR,q PCR)检测,分析样品中DNA残留量。对建立的两种检测体系进行专属性、精密度、准确度、耐用性验证,并确定两种方法的检测限和定量限。结果建立的q PCR体系标准曲线的相关系数(R2)均高于0. 99,能特异性地检测CHO细胞DNA,对其他种属DNA无扩增反应。不同DNA加标量样品的DNA回收率相近,均值均在60. 0%～140. 0%,3次测定的相对标准偏差(RSD)均小于30%。不同的退火温度反应条件下,RSD不大于30%。基于磁珠分离法的qPCR检测体系能检测出DNA残留浓度为5 pg/m L的DNA样品,定量限可达10 pg/mL;基于化学沉淀法的qPCR检测体系能检测出DNA残留浓度为0. 125 pg/m L的DNA样品,定量限可达1. 5 pg/mL。结论建立并优化了两种准确测定生物制品宿主细胞DNA残留量的处理样品方法,其中化学沉淀法检测限和定量限较低,更适合低浓度生物制品的样品处理。
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| 关 键 词： | 宿主细胞DNA 定量PCR CHO细胞系 化学沉淀法 磁珠分离法 |
Development of two methods for determination of residual host cell DNA in biological products |
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