| 长效重组人生长激素纯化液中CHO-K1细胞残留DNA实时荧光定量PCR检测方法的建立及验证 |
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| 引用本文： | 刘莹,刘玉林,俞露,刘涵,刘云南,王莹,刘琳琳,王宇. 长效重组人生长激素纯化液中CHO-K1细胞残留DNA实时荧光定量PCR检测方法的建立及验证[J]. 中国生物制品学杂志, 2019, 0(6) |
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| 作者姓名： | 刘莹 刘玉林 俞露 刘涵 刘云南 王莹 刘琳琳 王宇 |
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| 作者单位： | 长春生物制品研究所有限责任公司 |
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| 摘 要： | 目的建立检测CHO-K1细胞表达长效重组人生长激素(Fc-recombinant human growth hormone,Fc-rhGH)纯化液中残留DNA的实时荧光定量PCR方法,并进行验证。方法提取CHO-K1细胞基因组DNA,特异性PCR扩增后,克隆至pMD18-T载体,构建重组质粒,以其为标准品,建立实时荧光定量PCR检测方法;并对方法进行灵敏度、线性、准确度、精密度、特异性及耐用性验证。结果建立的方法灵敏度可达2. 6×10~1 copies/μL。标准曲线的回归方程为y=-3. 487 x+30. 201,R~2=0. 999;检测样品中DNA回收率在73. 56%～101. 87%范围内,RSD均小于10%;该方法可特异性扩增CHO-K1细胞的基因组DNA,而Vero细胞、MDCK细胞、Wish细胞及大肠埃希菌等基因组DNA均未见明显的扩增;样品精密度测定Ct的RSD在0. 4%～2. 95%之间;于两种不同PCR仪器上检测标准品,扩增效率分别为98%、99%,相关系数R~2均为0. 999。结论成功建立了一种检测CHO-K1细胞表达Fc-rhGH纯化液的残留DNA的实时荧光定量PCR方法,该方法具有较好的灵敏度、线性、准确度、精密度、特异性和耐用性。
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| 关 键 词： | 实时荧光定量PCR 重组人生长激素 CHO-K1细胞 残留DNA |
Development and verification of real-time fluorescent quantitative PCR assay for residual CHO cell DNA in purified fluid of long-acting Fc-recombinant human growth hormone |
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