| 牛乳中蜡样芽孢杆菌荧光定量PCR检测方法的建立及验证 |
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| 引用本文： | 杨健,侯婷婷,佐兆杭,郭瑜,姚笛.牛乳中蜡样芽孢杆菌荧光定量PCR检测方法的建立及验证[J].粉末涂料与涂装,2019(3). |
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| 作者姓名： | 杨健 侯婷婷 佐兆杭 郭瑜 姚笛 |
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| 作者单位： | 黑龙江八一农垦大学食品学院 |
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| 摘 要： | 目的建立一种快速检测牛乳中蜡样芽孢杆菌的荧光定量PCR方法,并进行验证。方法根据GenBank中登录的蜡样芽孢杆菌gyrB基因序列及荧光定量PCR要求,设计合适的特异性引物,提取菌体DNA,对目的基因进行扩增及克隆;以重组质粒为模板进行荧光定量PCR扩增,绘制标准曲线;以蜡样芽孢杆菌DNA为模板进行荧光定量PCR扩增,确定其扩增条件。对建立的方法进行特异性及灵敏性验证。结果建立的方法检测其他3种牛乳中常见致病菌(大肠埃希菌、志贺菌、沙门菌)未见特异性扩增,即无交叉反应;最低检出限为1×10~(-7) ng/μL。以掺入蜡样芽孢杆菌的牛乳为样品,可检测到牛乳中10. 4 CFU/mL的蜡样芽孢杆菌,优于国标方法(GB 4789. 14-2014)检测含有相同菌落数的蜡样芽孢杆菌(仅能检测到1. 04×10~2 CFU/mL)。结论建立的方法特异性强,灵敏性高,适用于快速、准确检测牛乳中的蜡样芽孢杆菌,为实验室快速检测致病菌提供了参考。
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| 关 键 词： | 荧光定量PCR 蜡样芽孢杆菌 gyrB基因 |
Establishment and verification of fluorescence quantitative PCR assay for Bacillus cereus in milk |
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