| 鸡源细菌中5种四环素耐药基因多重PCR检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 白龙,邵毅,黄柳娟,冯博,周昌艳,索玉娟,白亚龙,林淼.鸡源细菌中5种四环素耐药基因多重PCR检测方法的建立[J].食品与机械,2018,34(10):55-59,90. |
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| 作者姓名： | 白龙 邵毅 黄柳娟 冯博 周昌艳 索玉娟 白亚龙 林淼 |
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| 作者单位： | 上海市农业科学院农产品质量标准与检测技术研究所，上海 201403；上海理工大学医疗器械与食品学院，上海 200093;上海市农业科学院农产品质量标准与检测技术研究所，上海 201403；上海市设施园艺技术重点实验室，上海 201403 |
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| 基金项目： | 上海市科技兴农重点攻关项目（应用基础类）（编号：沪农科攻字（2014）第7-3-6号）；国家自然科学基金青年科学基金项目（编号：31401599）；上海市青年科技英才扬帆计划项目（编号：14YF1413000） |
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| 摘 要： | 为建立一种同步检测鸡源细菌中5种四环素耐药基因tetA、tetD、tetG、tetS和tetX的多重聚合酶链式反应(PCR)方法,优化了多重PCR体系的引物和Taq DNA聚合酶浓度及退火温度等参数,并考察了方法的灵敏度、特异性和适用性。建立的多重PCR反应技术的最佳反应体系为:混合DNA模板5μL,Taq酶1μL,tetA和tetX的正反向引物各0.5μL,tetG、tetD和tetS的正反向引物各1.0μL,dNTP4μL,MgCl24μL,10×PCR反应缓冲液5μL,最终用dd H2O补齐至50μL;反应程序为:95℃预变性5min;95℃变性30s,55℃退火30s,72℃延伸1min,35个循环;72℃延伸10min。该方法的灵敏度为102 CFU/mL,且能广谱地检测多种鸡源细菌中的5种四环素耐药基因。与传统的单重PCR方法相比,该多重PCR技术快速高效、适用性广。
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| 关 键 词： | 鸡源细菌 四环素耐药基因 多重聚合酶链式反应 快速检测 |
| 收稿时间： | 2018/6/27 0:00:00 |
Establishment of a multiplex PCR system for detection of five tetracycline resistance genes in poultry bacteria |
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| BAILong,SHAOYi,HUANGLiujuan,FENGBo,ZHOUChangyan,SUOYujuan,BAIYalong,LINMiao.Establishment of a multiplex PCR system for detection of five tetracycline resistance genes in poultry bacteria[J].Food and Machinery,2018,34(10):55-59,90. |
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| Authors: | BAILong SHAOYi HUANGLiujuan FENGBo ZHOUChangyan SUOYujuan BAIYalong LINMiao |
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| Affiliation: | Institute for Agri-Food Standards and Testing Technology, Shanghai Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 201403, China; School of Medical Instrument and Food Engineering, University of Shanghai for Science and Technology, Shanghai 200093, China;Institute for Agri-Food Standards and Testing Technology, Shanghai Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 201403, China; Shanghai Key Laboratory of Protected Horticultural Technology, Shanghai 201403, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | poultry bacteria antibiotic resistance gene multiplex polymerase chain reaction rapid detection |
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