大菱鲆鱼皮透明质酸酶的提取及酶学特性研究

以大菱鲆鱼皮为原料,经pH 4.7乙酸-乙酸钠缓冲液提取、硫酸铵分级沉淀、透析后获得鱼皮透明质酸粗酶液,并对其酶学性质进行研究。结果表明,鱼皮透明质酸粗酶的最适pH为6.6,最适反应温度为20℃,在-3℃～45℃具有较高稳定性,浓度为0.15 mol/L的NaCl可使鱼皮透明质酸酶保持较高活性。50 mmol/L的金属离子Ca~(2+)、Mg~(2+)、Zn~(2+)、Cu~(2+)、Fe~(2+)、Fe~(3+),50 mmol/L的EDTA、L-半胱氨酸和抗坏血酸对鱼皮透明质酸酶均具有抑制作用。双倒数法绘制米氏动力学曲线确定米氏常数K_m为0.094 mg/mL,鱼皮透明质酸酶对不同底物的水解能力依次为:肝素钠透明质酸硫酸软骨素C硫酸软骨素A。在4℃和-18℃条件下贮藏32 d,鱼皮透明质酸酶活性损失分别为79.21%和56.78%。