| 人抗氧化蛋白-1在大肠杆菌中的表达、纯化及活性鉴定 |
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| 引用本文： | 毛爽,陈少沛,颜晟,王海鹰,宁正祥,李杉,王菊芳.人抗氧化蛋白-1在大肠杆菌中的表达、纯化及活性鉴定[J].现代食品科技,2014,30(9):55-59. |
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| 作者姓名： | 毛爽 陈少沛 颜晟 王海鹰 宁正祥 李杉 王菊芳 |
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| 作者单位： | 华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州 510006;华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州 510006;华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州 510006;华南理工大学轻工与食品学院，广东广州 510006;华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州 510006;华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州 510006;华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州 510006 |
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| 基金项目： | 卫生部重大新药创制(2011ZX09506-001)；新世纪优秀人才支持计划资助（NCET-10-0399）；中国博士后科学基金（2012M521593；2013T60796） |
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| 摘 要： | 为得到较纯的具有活性的人抗氧化蛋白Peroxiredoxin1(Prx1),本文先用PCR的方法扩增了人Prx1的cDNA序列,然后将其连接到pET28表达载体上,从而构建了编码全长的人抗氧化蛋白-1基因的pET28-Prx1原核表达质粒。经双酶切及测序鉴定后将表达质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,并通过SDS-PAGE和western blot来鉴定表达产物。随后用Ni-NTA螯合亲和层析的方法纯化重组蛋白,并测定该酶的米氏常数,用质粒保护实验鉴定该蛋白其活性。最终表达载体经酶切和测序鉴定证实构建成功,表达产物在SDS-PAGE和western blot图的25 kD左右,与prx1真实的蛋白分子量相符,说明Prx1蛋白成功表达。Prx1纯化后产量达到7.59 mg/g菌体,纯度达到88.50%。纯化后的Prx1在37℃和pH 7.4的条件下催化H2O2反应的米氏常数Km为2.06×10-4 mol/L,质粒保护实验表明Prx1可以保护pUC18质粒免受氧化损伤。因此,Prx1在大肠杆菌中成功表达并得到较纯的活性蛋白。
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| 关 键 词： | 抗氧化蛋白 重组表达 亲和层析 蛋白印迹法 氧化损伤 质粒保护实验 |
| 收稿时间： | 2014/3/28 0:00:00 |
Purification and Activity of Human Peroxiredoxin 1 Expressed in E.coli |
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| MAO Shuang,CHEN Shao-pei,YAN Sheng,WANG Hai-ying,NING Zheng-xiang,LI Shan and WANG Ju-fang.Purification and Activity of Human Peroxiredoxin 1 Expressed in E.coli[J].Modern Food Science & Technology,2014,30(9):55-59. |
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| Authors: | MAO Shuang CHEN Shao-pei YAN Sheng WANG Hai-ying NING Zheng-xiang LI Shan and WANG Ju-fang |
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| Affiliation: | School of Bioscience and Bioengineering, South China University of Technology, Guangzhou 510006, China;School of Bioscience and Bioengineering, South China University of Technology, Guangzhou 510006, China;School of Bioscience and Bioengineering, South China University of Technology, Guangzhou 510006, China;School of Light industry and Food Sciences, South China University of Technology, Guangzhou 510006, China;School of Bioscience and Bioengineering, South China University of Technology, Guangzhou 510006, China;School of Bioscience and Bioengineering, South China University of Technology, Guangzhou 510006, China;School of Bioscience and Bioengineering, South China University of Technology, Guangzhou 510006, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | peroxiredoxin 1 recombinant expression affinity chromatography western blotting oxidative damage plasmid protection assay |
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