| 摘 要： | 本研究通过超滤、Sephedax G200凝胶过滤层析纯化来源于唾液乳杆菌XH4B(GeneBank索引号:JX125456)的α-半乳糖苷酶,并对其酶学性质进行了研究。结果表明,超滤时采用100 kDa的滤膜,分子量大于100 kDa的组分有酶活。利用Sephadex G200进行柱层析洗脱至370~400 min时得到的组分表现出明显的α-半乳糖苷酶活力。SDS-PAGE电泳结果表明,该酶的蛋白质单体分子量为70~80 kDa,未变性的酶蛋白应为多聚体,总分子量大于100 kDa。利用酶比活力计算的结果,相对于粗酶,超滤纯化效率为149.80%,柱层析纯化效率为391.91%。经响应面优化,确定唾液乳杆菌XH4B来源的α-半乳糖苷酶最佳酶促反应条件为:柠檬酸缓冲液pH值5.5,离子强度0.15 mol/L,反应温度52℃。该酶对pNPG的Km值为0.817。相对于纯水,各类金属离子中,仅有K+和Na+对酶活力有正向的激活作用,酶活力分别达到了102.50%和104.18%。EDTA(96.54%),Mg2+(91.53%),Ca2+(82.51%),以及DTT(79.38%)能够较大限度保留酶活力,而Zn2+、Cu2+、Pb2+、Fe3+和Vc则显著阻碍了酶促活力,仅能保留5~7%。
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