| 棘孢曲霉β-葡萄糖苷酶的乳酸乳球菌表达 |
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| 引用本文： | 黄建飞,成丽丽,李娜,司丽芳,罗立新.棘孢曲霉β-葡萄糖苷酶的乳酸乳球菌表达[J].现代食品科技,2014,30(5):33-37. |
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| 作者姓名： | 黄建飞 成丽丽 李娜 司丽芳 罗立新 |
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| 作者单位： | 华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州 510006;华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州 510006;华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州 510006;华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州 510006;华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州 510006 |
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| 基金项目： | 广东省农业攻关计划项目（2006B20501001） |
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| 摘 要： | 构建棘孢曲霉β-葡萄糖苷酶食品级分泌表达载体并在乳酸乳球菌MG1363(L.lactis MG1363)中实现表达。通过PCR扩增L.lactis MG1363基因组中分泌信号肽Usp45、质粒pLEB590的乳链菌肽(Nisin)抗性基因NisI和质粒pPIC9k-Abgl的棘孢曲霉β-葡萄糖苷酶基因Abgl,PCR方法连接后获得片段Usp45-Abgl-NisI,将其克隆到质粒pMD19中,CaCl2法转化到E.coli DH5α,测序鉴定后将该片段连接到大肠杆菌-乳酸菌穿梭质粒pMG36e中并转化到E.coli XL1-Blue,得重组子E.coli XL1-Blue/pMG36e-Usp45-Abgl-NisI。通过PCR方法敲除质粒pMG36e-Usp45-Abgl-NisI中红霉素抗性基因以构建食品级分泌载体pMG36N-Usp45-Abgl-NisI,将其电转到L.lactis MG1363中。转化子E.coli XL1-Blue/pMG36e-Usp45-Abgl-NisI能将β-葡萄糖苷酶分泌到胞外使七叶苷平板显色,L.lactis MG1363/pMG36N-Usp45-Abgl-NisI能在20 IU/mL Nisin上生长,经RT-PCR验证β-葡萄糖苷酶在乳酸乳球菌中实现表达。表明分泌型表达载体构建成功,为其在乳酸乳球菌中实现食品级活性表达奠定基础。
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| 关 键 词： | 棘孢曲霉 β-葡萄糖苷酶 大肠杆菌 分泌表达 乳酸乳球菌 |
| 收稿时间： | 2013/12/31 0:00:00 |
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