金雀异黄酮通过调控Ca2＋-CaMKIV通路对Aβ25-35诱导海马神经元损伤的保护作用

目的：观察金雀异黄酮通过Ca2＋-钙调蛋白依赖性蛋白激酶IV（calmodulin-dependent protein kinase IV，CaMKIV）通路对Aβ25-35诱导海马神经元损伤的保护作用。方法：取24 h内新生SD乳鼠的海马组织，进行神经元的分离纯化和培养，并用免疫荧光染色进行鉴定。神经元细胞随机分为空白对照组、模型组、金雀异黄酮组（50 μmol/L）和阳性对照戊酸雌二醇组（10 μmol/L），金雀异黄酮组和戊酸雌二醇组预处理3 h后，除空白对照组外，其他各组采用Aβ25-35诱导海马神经元构建细胞损伤模型。利用噻唑蓝法检测细胞存活率，荧光探针检测神经元细胞内Ca2＋荧光强度，Western blot检测钙调蛋白（calmodulin，CaM）、钙调蛋白依赖性蛋白激酶激酶（calcium/calmodulin dependent protein kinase kinase，CaMKK）、磷酸化钙调蛋白依赖性蛋白激酶IV（p-calmodulin-dependent protein kinase，p-CaMKIV）和p-Tau蛋白的相对表达量。结果：免疫荧光分析结果显示大鼠海马神经元分离成功。与空白对照组比较，模型组海马神经元细胞存活率极显著下降（P＜0.01），细胞Ca2＋荧光强度极显著升高（P＜0.01），CaM、CaMKK、p-CaMKIV和p-Tau蛋白相对表达量极显著提高（P＜0.01）；与模型组比较，金雀异黄酮极显著提高了Aβ25-35所致海马神经元损伤模型中细胞的存活率（P＜0.01），降低了细胞Ca2＋荧光强度（P＜0.01），下调了CaM、CaMKK、p-CaMKIV和p-Tau蛋白相对表达量（P＜0.01）。结论：金雀异黄酮对Aβ25-35诱导的海马神经元损伤具有明显的神经保护作用，其作用可能是通过Ca2＋-CaMKIV通路介导的。