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| 人血管内皮生长因子189在毕赤酵母中的表达、纯化及其活性 | |
| 作者单位： | ;1.新乡医学院生命科学技术学院河南省高校合成生物改造工程与应用重点实验室 |
| 摘 要： | 目的在毕赤酵母中表达人血管内皮生长因子189(vascular endothelial growth factor 189,VEGF189),并进行纯化,同时检测其在体外的生物活性。方法以人VEGF183为模板,经重叠PCR法获得VEGF189基因,亚克隆至pPIC9K中,获得重组表达质粒pPIC9K-VEGF189。将其转化至E.coli DH5α中进行扩增,提取质粒,用SacⅠ酶线性化,电转至毕赤酵母GS115中,经4 mg/ml G418-YPD平板筛选高拷贝克隆。采用甲醇进行诱导表达,并通过肝素琼脂糖树脂亲和层析进行纯化。血管通透性试验检测其生物活性。结果经PCR鉴定证明重组表达质粒pPIC9K-VEGF189构建正确。VEGF189蛋白的表达及纯化产物均可与兔抗人VEGF183多克隆抗体发生特异性结合,纯化蛋白纯度达95%以上,浓度为0.291 1 mg/ml,可增加血管的通透性。结论本实验通过酵母表达系统获得了具有活性的VEGF189蛋白,为在体外探讨该蛋白在血管生成中的作用奠定了基础。 |
| 关 键 词： | 人血管内皮生长因子189 毕氏酵母 纯化 血管通透性试验 生物学活性 |
Expression of human vascular endothelial growth factor 189 in Pichia pastoris and purification and activity of expressed product |
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| Abstract: | |
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