| 基于酶反应动力学理论优化脂肪酶活力测定体系 |
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| 引用本文： | 张帆,程路峰,曹红,何德飞,郑兰兰,李春.基于酶反应动力学理论优化脂肪酶活力测定体系[J].中国油脂,2023,48(5):146-152. |
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| 作者姓名： | 张帆 程路峰 曹红 何德飞 郑兰兰 李春 |
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| 作者单位： | 1.新疆医科大学 药学院，乌鲁木齐 830011； 2.嘉兴学院 生物与化学工程学院，浙江 嘉兴 314001；
3.浙江格蕾斯生物科技有限公司，浙江 嘉兴 314000； 4.清华大学 化学工程系，北京 100084 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（21266029）；浙江省自
然科学基金项目（LY17B060011） |
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| 摘 要： | 为了提高棕榈酸对硝基苯酯(p-NPP)法测定脂肪酶活力的灵敏度和准确度，以来源于Rhizopus oryzae的脂肪酶Lipase F-AP 15为研究对象，首先对其最适反应pH和反应温度进行优化，然后将表面活性剂作为激活因子引入酶活力测定体系，探究影响机制，并依据酶反应动力学理论优化测定条件(底物浓度、酶质量浓度、反应时间),对优化的p-NPP法的重复性和准确性进行了检验，最后以另一个来源的脂肪酶Lipase-PPL为模型，以同样思路与方法改进与优化其酶活力测定体系，以考察优化方法和思路的适用性。结果表明：表面活性剂PEG 8000的引入使得覆盖在脂肪酶活性位点的α-螺旋结构被重排而打开，脂肪酶由封闭构象转为并保持在活化构象，脂肪酶活性增强；优化测定体系的最适条件为pH 8.0、反应温度30℃、酶质量浓度1.00 mg/mL、底物浓度6 mmol/L、反应时间5 min,在此条件下测得的酶活力是常用p-NPP法(pH 8.0、反应温度30℃、酶质量浓度2.50 mg/mL、底物浓度10 mmol/L、反应时间8 min)测得酶活力的1.4倍；重复性和准确性试验显示，优化p-NPP法重...
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| 关 键 词： | 脂肪酶 酶活力测定 酶反应动力学 表面活性剂 |
Optimization of lipase activity assay system based on
enzyme reaction kinetics theory |
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| ZHANG Fan,CHENG Lufeng,CAO Hong,HE Defei,ZHENG Lanlan,LI Chun.Optimization of lipase activity assay system based on
enzyme reaction kinetics theory[J].China Oils and Fats,2023,48(5):146-152. |
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| Authors: | ZHANG Fan CHENG Lufeng CAO Hong HE Defei ZHENG Lanlan LI Chun |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | lipase enzyme activity assay enzyme reaction kinetics surfactant |
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