TRAIL_(114~281)-IL-24融合蛋白的原核表达及其体外抗肿瘤细胞活性 |
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引用本文: | 刘朝阳,高丹,徐帆洪.TRAIL_(114~281)-IL-24融合蛋白的原核表达及其体外抗肿瘤细胞活性[J].粉末涂料与涂装,2010,23(9). |
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作者姓名: | 刘朝阳 高丹 徐帆洪 |
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作者单位: | 上海生物制品研究所疫苗一室,上海,200052 |
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摘 要: | 目的原核表达肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF)相关的凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)114~281肽和人白细胞介素-24(Interleukin-24,IL-24)融合蛋白,并检测其体外抗肿瘤细胞活性。方法以人外周血单个核细胞总RNA为模板,PCR扩增TRAIL114~281和IL-24基因,经T4DNA连接酶连接成融合基因,克隆至pET-28a载体中,构建重组原核表达质粒pET-28a/TRAIL114~281-IL-24,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白TI经层析法纯化后,进行Western blot分析,并采用MTT法检测其对肿瘤细胞增殖的影响,caspase3活性检测试剂盒检测其对不同肿瘤细胞caspase3活性的影响。结果重组表达质粒经酶切鉴定及测序证明构建正确;TI融合蛋白以包涵体形式表达,表达量约占菌体总蛋白的30%;纯化的重组蛋白纯度可达95%,且可与鼠抗人IL-24抗体发生特异性反应;经复性的蛋白能明显抑制人宫颈癌上皮细胞HeLa和人乳腺癌细胞MCF-7增殖,并显著提高肿瘤细胞的caspase3活性。结论已在大肠杆菌中表达了TRAIL114~281-IL-24融合蛋白,其具有诱导部分肿瘤细胞凋亡的活性。
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关 键 词: | TNF相关凋亡诱导配体 白细胞介素-24 重组融合蛋白质类 原核细胞 基因表达 肿瘤 细胞调亡 胱天蛋白酶3 |
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