| 肺炎链球菌表面蛋白C对人嗜中性粒细胞释放CXCL8的影响 |
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| 引用本文： | 刘清爽,甘萍,曹炬,徐蕾. 肺炎链球菌表面蛋白C对人嗜中性粒细胞释放CXCL8的影响[J]. 中国生物制品学杂志, 2012, 25(8): 977-981 |
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| 作者姓名： | 刘清爽 甘萍 曹炬 徐蕾 |
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| 作者单位： | 刘清爽 (重庆医科大学附属儿童医院胃肠新生儿外科 重庆400014) ； 甘萍 (重庆三峡中心医院儿童分院儿内科 重庆404000) ； 曹炬 (重庆医科大学附属第一医院检验科 重庆400016) ； 徐蕾 (重庆医科大学病原生物学教研室 重庆400016) ； |
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| 摘 要： | 目的原核表达肺炎链球菌表面蛋白C(Pneumococcal surface protein C,PspC),并分析该蛋白对人嗜中性粒细胞释放CXCL8的影响。方法将重组质粒pET-32a(+)/PspC转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达TRx-His-PspC融合蛋白并纯化;通过肠激酶切掉融合蛋白的TRx-His部分,获得PspC蛋白,免疫小鼠,获得抗PspC抗体。分离人外周血嗜中性粒细胞,经MTT法检测PspC蛋白对嗜中性粒细胞增殖活力的影响;QRT-PCR检测PspC蛋白及抗PspC抗体对人嗜中性粒细胞释放CXCL8的影响。结果表达的TRx-His-PspC融合蛋白相对分子质量约为80 000,目的蛋白约占菌体总蛋白的21%,可与His Tag McAb特异性结合。获得的PspC蛋白相对分子量约为60 000,免疫小鼠获得了高滴度的抗PspC中和抗体(1∶12 000)。分离的人外周血嗜中性粒细胞纯度>98%,活细胞比例大于96%,经不同浓度的PspC蛋白刺激人嗜中性粒细胞,不会引起宿主细胞的细胞毒作用;不同浓度的PspC蛋白刺激人嗜中性粒细胞8 h后,CXCL8基因mRNA转录水平显著上调(P<0.01),且呈剂量依赖性;CXCL8的释放均呈剂量依赖性增强(P<0.01),且24 h高于12 h;抗PspC抗体可显著抑制PspC蛋白刺激人嗜中性粒细胞释放CXCL8。结论 PspC蛋白可上调人嗜中性粒细胞趋化因子CXCL8的合成和释放,揭示了嗜中性粒细胞和肺炎链球菌致病因素之间的关系,为控制肺炎链球菌侵入性疾病奠定了基础。
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| 关 键 词： | 肺炎链球菌 表面蛋白 嗜中性粒细胞 白细胞介素-8 |
Effect of pneumococcal surface protein C on release of CXCL8 by human neutrophils |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Streptococcus pneumoniae Surface protein Neutrophils Interleukin-8 |
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