| 定点饱和突变改善米曲霉木聚糖酶的温度特性 |
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| 引用本文： | 吴芹,臧嘉,胡蝶,王瑞,邬敏辰. 定点饱和突变改善米曲霉木聚糖酶的温度特性[J]. 食品与生物技术学报, 2019, 38(7): 65-70 |
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| 作者姓名： | 吴芹 臧嘉 胡蝶 王瑞 邬敏辰 |
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| 作者单位： | 江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122,江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122,江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122,江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122,江南大学 无锡医学院，江苏 无锡 214122 |
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| 摘 要： | 为改善米曲霉木聚糖酶AoXyn11A的温度特性,基于其三维结构的同源建模和分子动力学模拟,随机替换最高B-factor值位点处的Gly~(21)。以重组表达质粒pET-28a-Aoxyn11A为模板,采用全质粒两步PCR技术对AoXyn11A基因(Aoxyn11A)中编码Gly~(21)的密码子实施饱和突变,将pET-28a-Aoxyn11A各突变体转化E. coli BL21(DE3),构建了突变转化子文库。以酶的热稳定性为指标,从文库中筛选出最优突变转化子(E. coli/Aoxyn11A~(G21I))。DNA测序结果显示,E.coli/Aoxyn11A~(G21I)表达一种由Ile~(21)替换了Gly~(21)的突变酶AoXyn11A~(G21I)。温度特性分析表明:突变酶的最适温度由突变前的55℃提高至65℃;AoXyn11A~(G21I)在55℃及以下稳定,较AoXyn11A提高了7℃。另外,AoXyn11A突变前后的pH特性改变不大。
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| 关 键 词： | 定点饱和突变；木聚糖酶；温度特性；分子动力学模拟；B-factor值 |
Improvement in the Temperature Properties of Xylanase by Site-Saturated Mutagenesis |
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| WU Qin,ZANG Ji,HU Die,WANG Rui and WU Minchen. Improvement in the Temperature Properties of Xylanase by Site-Saturated Mutagenesis[J]. Journal of Food Science and Biotechnology, 2019, 38(7): 65-70 |
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| Authors: | WU Qin ZANG Ji HU Die WANG Rui WU Minchen |
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