三七细胞中SS、DS共超表达对皂苷合成的影响

为研究三七细胞中SS、DS共超表达对皂苷合成的影响,构建了三七SS超表达载体,并以已超表达了DS的愈伤组织为侵染材料,借助农杆菌LBA4404将SS导入并整合到三七基因组中,采用QRT-PCR法检测转基因株系中SS、DS的表达水平,香草醛-冰醋酸-高氯酸显色法检测皂苷含量。结果显示:三株同时转SS、DS细胞系(T-4、T-5、T-9)中,SS的相对表达量分别为仅转DS株系的5.66、7.37、7.46倍;DS的相对表达量分别为仅转DS株系的1.39、2、1.41倍;总皂苷含量为仅转DS株系的1.7倍,普通细胞的2.4倍;5种单体皂苷:R1、Rg1、Re、Rb1、Rd含量总和分别为仅转DS株系的1.33、1.61、1.71倍,普通细胞的5.62、6.81、7.26倍;此外,Re含量出现大幅增加,达到三七药材的5~6倍。表明SS、DS在皂苷生物合成途径中均起正调控作用,双基因共超表达能进一步提高皂苷含量,揭示途径中两个甚至更多基因间可能存在正协同调控效应。