重组Bacillus subitilis(pMA5/lapgad)的构建及其在γ-氨基丁酸合成中的应用

从实验室保存的Lactobacillus plantarum ZJ3443中克隆得到GAD基因,并对其进行了生物信息学分析。利用得到的GAD基因构建质粒pMA5/lapgad,在Bacillus subtilis WB600系统中实现了GAD基因的异源重组表达,其胞内酶活达到0.35 U/mg。在此基础上对摇瓶下利用重组菌全细胞转化谷氨酸合成γ-氨基丁酸的条件进行了优化,其最佳条件为:转化温度37℃,转化pH为4.5,添加1 mmol/L Ca2+作为激活剂。这是国内首次报道GAD在枯草芽孢杆菌中的活性表达,为利用基因工程技术实现全细胞合成γ-氨基丁酸打下了基础,为生产实践提供了一定的指导意义。