| (His)6-tag位置和N/C-末端截短改变重组副溶血弧菌磷脂酶D的酶学特性 |
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| 引用本文： | 王方华,刘思雨,魏瑞霞,杨博,王永华.(His)6-tag位置和N/C-末端截短改变重组副溶血弧菌磷脂酶D的酶学特性[J].现代食品科技,2021,37(3):53-61. |
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| 作者姓名： | 王方华 刘思雨 魏瑞霞 杨博 王永华 |
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| 作者单位： | （1.华南理工大学食品科学与工程学院，广东广州 510640）;（2.华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州 510006） |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划项目（2018YFC0311100）；国家自然科学基金项目（31972014） |
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| 摘 要： | 本研究探讨了(His)6-tag位置和N/C-末端截短对重组副溶血弧菌磷脂酶D(VpPLD)酶学特性的影响。研究发现:(His)6-tag位置对于VpPLD的活性有较大影响,其中(His)6-tag位于N-末端时测得酶活力最高,而位于C-末端时最低,且活性差异不依赖于水解底物。此外,(His)6-tag位于C-末端导致VpPLD的最适反应pH从7.0变为8.0;删除VpPLD成熟蛋白N-末端前34个氨基酸能显著增强VpPLD对1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷脂酰-L-丝氨酸(DMPS)的水解活性,但对于其他磷脂的水解活性并没有明显改变;删除VpPLD成熟蛋白C-末端肽段(469~487)会显著降低其对磷脂底物的催化活性;与(His)6-VpPLD-WT和(His)6-VpPLD-Δ469-487相比,(His)6-VpPLD-Δ451-487对1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(DPPC)、1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷脂酰-(l'-rac-甘油)(DMPG)和1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷脂酰乙醇胺(DMPE)的选择性均显著降低,该结果表明C-末端肽段(451-469)对VpPLD的底物选择性发挥重要影响作用。以上结果表明,(His)6-tag的位置以及N/C-末端肽段对于重组副溶血弧菌磷脂酶D的催化活性和底物选择性具有重要影响作用。
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| 关 键 词： | 磷脂酶D 副溶血弧菌 底物选择性 磷脂 |
| 收稿时间： | 2020/4/30 0:00:00 |
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