| 及鉴定 |
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| 引用本文： | 母敬郁 张桂荣 王峤 尚庆义 杨翰仪. 及鉴定[J]. 中国生物制品学杂志, 2001, 14(2): 78-80 |
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| 作者姓名： | 母敬郁 张桂荣 王峤 尚庆义 杨翰仪 |
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| 作者单位： | 母敬郁（吉林大学新民校区基础医学院生化教研室长春130021） 张桂荣（吉林大学新民校区基础医学院生化教研室长春130021） 王峤（吉林大学新民校区基础医学院生化教研室长春130021） 尚庆义（吉林大学新民校区基础医学院生化教研室长春130021） 杨翰仪（吉林大学新民校区基础医学院生化教研室长春130021） |
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| 基金项目： | 国家留学基金委1997年资助项目,长春市2000年科技发展资助项目.1,长春市第二医院;2,加拿大McMaster大学生化系. |
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| 摘 要： | 目的研制基因工程胰高血糖素,用于治疗因注射胰岛素或口服抗糖尿病药物而引起的严重低血糖反应.方法依据人胰高血糖素氨基酸组成序列,采用大肠杆菌出现频率高的氨基酸密码子,体外合成胰高血糖素基因序列,克隆于pGEX-1N质粒,转化入BL21(DE3)菌中,对阳性克隆转化质粒进行DNA测序.用IPTG诱导转化的胰高血糖素工程菌,产生谷胱苷肽转移酶的融合蛋白,经谷胱苷肽Sepharose4B亲和层析后,由FactorXa酶进行柱上切割,最后用RP-HPLC得到纯化产物.产品用质谱法测相对分子质量,并对N末端15个氨基酸测序.结果DNA测序显示克隆基因序列正确,产品相对分子质量为3486,N末端15个氨基酸序列与理论值相同,产率为1.9mg/L.结论获得以可溶性融合蛋白方式表达的胰高血糖素基因工程菌,适于快速生产天然序列重组胰高血糖素.
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| 关 键 词： | 胰高血糖素 基因克隆 表达 |
| 修稿时间： | 2000-04-12 |
Cloning,Expression and Characterization of Recombinant Human Glucagon |
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