| 定点突变改善β-甘露聚糖酶AuMan5A的酶学性质 |
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| 引用本文： | 董运海,胡蝶,邬敏辰,唐诗涵,王春娟,李剑芳.定点突变改善β-甘露聚糖酶AuMan5A的酶学性质[J].食品与生物技术学报,2017,36(8):819-825. |
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| 作者姓名： | 董运海 胡蝶 邬敏辰 唐诗涵 王春娟 李剑芳 |
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| 作者单位： | 江南大学 食品学院，江苏 无锡 214122,江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122,江南大学 无锡医学院，江苏 无锡214122,江南大学 食品学院，江苏 无锡 214122,江南大学 食品学院，江苏 无锡 214122,江南大学 食品学院，江苏 无锡 214122 |
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| 摘 要： | 基于糖苷水解酶5家族(GHF5)β-甘露聚糖酶一级、三维结构的比对和分析,对宇佐美曲霉GHF5β-甘露聚糖酶AuMan5A的关键位点氨基酸实施定点突变以获得酶学性质优良的突变酶AuMan5A~(G320D)。采用大引物PCR技术将AuMan5A基因(Auman5A)中编码Gly~(320)的密码子GGT突变为Asp~(320)的GAC,构建出突变酶基因Auman5A~(G320D)。分别将Auman5A和Auman5A~(G320D)在毕赤酵母GS115中进行了表达,分析了表达产物AuMan5A和AuMan5A~(G320D)的酶学性质。结果表明:AuMan5A~(G320D)的最适温度Topt由突变前的65℃提升至70℃,在70℃的半衰期t_(1/2)~(70)由原酶的10 min延长至25 min;AuMan5A~(G320D)的比活性由突变前的351.2 U/mg提高到1 729.1 U/mg,其催化效率(k_(cat)/K_m)是原酶的9.3倍。将Gly~(320)突变为Asp~(320)不仅改善了AuMan5A的温度特性,而且显著提高了该酶的比活性和催化效率。
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| 关 键 词： | β-甘露聚糖酶 定点突变 温度特性 比活性 催化效率 |
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