鲫鱼MBSP的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备 |
| |
作者姓名: | 李婷 李欢 陈海英 杜翠红 |
| |
作者单位: | 集美大学 食品与生物工程学院,福建 厦门 361021; 福建省水产品深加工工程研究中心,福建 厦门361021,集美大学 食品与生物工程学院,福建 厦门 361021; 福建省水产品深加工工程研究中心,福建 厦门361021,集美大学 食品与生物工程学院,福建 厦门 361021; 福建省水产品深加工工程研究中心,福建 厦门361021,集美大学 食品与生物工程学院,福建 厦门 361021; 福建省水产品深加工工程研究中心,福建 厦门361021 |
| |
摘 要: | 构建鲫鱼肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(MBSP)的原核表达菌株Rosetta(pET28aMBSP),获得重组MBSP,以制备MBSP多克隆抗体。将鲫鱼MBSP全长基因(MBSP)借助表达载体pET-28a构建重组表达菌株Rosetta(pET28a-MBSP),并进行诱导表达后获得重组MBSP。利用Ni-NTA agarose亲和层析柱纯化重组蛋白并进行质谱鉴定。以纯化后的重组MBSP作为抗原免疫新西兰兔,获得MBSP多克隆抗体。分别采用ELISA和Western blot技术测定其效价和特异性。诱导表达的重组蛋白经SDS-PAGE分析、Western blot检测及质谱鉴定,结果表明该蛋白质为重组MBSP,其相对分子质量约为28×10~3,与天然MBSP大小一致,主要以包涵体形式存在。将其免疫兔子后,从血清中获得了与MBSP发生特异性反应的高效价多克隆抗体。本研究中成功表达和纯化了重组MBSP蛋白,制备了高效价的特异性MBSP多克隆抗体,为MBSP的相关研究奠定基础。
|
关 键 词: | 肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶;原核表达;蛋白纯化;Western blot;多克隆抗体 |
本文献已被 CNKI 等数据库收录! |
| 点击此处可从《食品与生物技术学报》浏览原始摘要信息 |
|
点击此处可从《食品与生物技术学报》下载免费的PDF全文 |
|