| 吡咯喹啉醌高通量检测方法的建立与优化 |
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| 引用本文： | 夏雨,周景文,陈坚.吡咯喹啉醌高通量检测方法的建立与优化[J].食品与生物技术学报,2017,36(2):122-128. |
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| 作者姓名： | 夏雨 周景文 陈坚 |
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| 作者单位： | 江南大学 工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122; 江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122,江南大学 工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122; 江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122,江南大学 工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122; 江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122 |
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| 摘 要： | 吡咯喹啉醌(Pyrroloquinoline quinone,PQQ)是一种新型辅酶,具有广阔的应用前景。传统PQQ检测方法在检测发酵液中PQQ浓度时都存在一定的缺陷,且检测效率偏低。本研究在大肠杆菌(Escherichia coli BL21(DE3))中表达E.coli K-12来源的葡萄糖脱氢酶(PQQGDH),并通过亲和层析分离纯化PQQGDH,得到了高浓度、高纯度的PQQGDH。通过酶液和PQQ样品用量的双因素正交实验对传统重组酶法的反应体系加以改进,得到适用于96孔板高通量检测的反应体系。结果表明30μL纯化后酶液、2μL PQQ样品配合1.2 m L的显色剂组成的显色体系检测效果最佳。该方法线性范围大且具有较高的精确度和重现性。本研究中利用高浓度、高纯度的PQQGDH配合96孔板和酶标仪,所建立的PQQ高通量检测方法,不仅降低了实验误差,而且大幅提高了PQQ发酵液样品的检测效率。
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| 关 键 词： | 吡咯喹啉醌 葡萄糖脱氢酶 亲和纯化 重组酶法检测 高通量检测 |
Establishment and Optimization of the High-Throughput Measurement of Pyrroloquinoline Quinone |
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| XIA Yu,ZHOU Jingwen and CHEN Jian.Establishment and Optimization of the High-Throughput Measurement of Pyrroloquinoline Quinone[J].Journal of Food Science and Biotechnology,2017,36(2):122-128. |
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| Authors: | XIA Yu ZHOU Jingwen and CHEN Jian |
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