| N-端置换提高木聚糖酶AoXyn11A的耐热性 |
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| 引用本文： | 何瑶,吴芹,殷欣,胡蝶,邬敏辰.N-端置换提高木聚糖酶AoXyn11A的耐热性[J].食品与生物技术学报,2017,36(8):855-861. |
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| 作者姓名： | 何瑶 吴芹 殷欣 胡蝶 邬敏辰 |
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| 作者单位： | 江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122,江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122,江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122,江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214122,江南大学 无锡医学院，江苏 无锡 214122 |
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| 摘 要： | 为提高米曲霉(Aspergillus oryzae)糖苷水解酶家族(GHF)11木聚糖酶AoXyn11A的耐热性,将其N-端置换为来源于嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)的同一家族耐热木聚糖酶pXYL11的对应区域。基于木聚糖酶耐热性的理性设计,采用大引物PCR技术将AoXyn11A基因(Aoxyn11A)的5′-端DNA片段置换为pXYL11人工合成基因(xyn11PM)的对应片段,构建出杂合木聚糖酶ATX11A基因(ATx11A)。分别将Aoxyn11A和ATx11A在毕赤酵母GS115中进行了表达,并分析了重组表达产物AoXyn11A和ATX11A的温度特性。结果表明:ATX11A的最适温度T_(opt)由AoXyn11A的50℃提升至65℃,在60℃的半衰期t_(1/2)~(60)为55 min,较AoXyn11A延长了41.3倍;ATX11A在55℃处理3 h保留60%以上的酶活性,而AoXyn11A处理15 min酶活性完全丧失。本研究通过N-端置换显著改善了AoXyn11A的温度特性。
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| 关 键 词： | 木聚糖酶 N-端置换 耐热性 分子动力学模拟 理性设计 |
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