| 牛传染性鼻气管炎病毒gE蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 |
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| 引用本文： | 赵微,毕莹,闻晓波,倪宏波. 牛传染性鼻气管炎病毒gE蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[J]. 中国生物制品学杂志, 2018, 0(2) |
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| 作者姓名： | 赵微 毕莹 闻晓波 倪宏波 |
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| 作者单位： | 黑龙江八一农垦大学动物科技学院; |
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| 摘 要： | 目的制备牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheities virus,IBRV)g E蛋白的单克隆抗体,并进行鉴定。方法将扩增的IBRV gE基因插入至载体p ET-32a(+),转化感受态E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组蛋白IBRV gE,通过Ni-NTA Agarous Kit纯化后,免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠脾细胞,与SP2/0细胞融合,间接免疫荧光法筛选阳性杂交瘤细胞。经小鼠腹腔注射杂交瘤细胞,3×10~6个/只,待小鼠腹腔膨大后,采集腹水,硫酸铵沉淀法纯化单克隆抗体,并进行亚类、浓度、染色体数目、Western blot及间接免疫荧光检测。结果重组蛋白IBRV gE相对分子质量约35 000,纯化后浓度为1.2 mg/mL。小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合后,筛选出1株稳定分泌IBRV单抗的杂交瘤细胞(命名为3G9),获得相应抗体浓度为1.46 mg/m L;为IgG1亚类,轻链为kappa链;染色体数目为95~105;可与IBRV发生特异性反应;可与接种IBRV毒株的MDBK细胞发生特异性结合,产生特异性荧光。结论采用原核表达系统表达并纯化了IBRV gE蛋白,成功制备了抗IBRV gE的单克隆抗体,为建立特异性的IBRV诊断方法及致病机理的研究奠定了基础。
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| 关 键 词： | 牛传染性鼻气管炎病毒 gE蛋白 单克隆抗体 |
Preparation and identification of monoclonal antibody against gE protein of bovine infectious rhinotracheitis virus |
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