基孔肯雅病毒E2蛋白的原核表达及纯化 |
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引用本文: | 郭丹丹,曹亮,田明尧,鲁会军,孙文超,张涵,汪伟,刘云霞,金宁一,郭焱.基孔肯雅病毒E2蛋白的原核表达及纯化[J].粉末涂料与涂装,2018(9). |
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作者姓名: | 郭丹丹 曹亮 田明尧 鲁会军 孙文超 张涵 汪伟 刘云霞 金宁一 郭焱 |
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作者单位: | 长春中医药大学药学院;军事医学科学院军事兽医研究所;吉林农业大学动物科学技术学院;温州大学病毒学研究所;长春中医药大学基础医学院 |
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摘 要: | 目的原核表达并纯化基孔肯雅病毒(Chikungunya virus,CHIKV)E2主要结构蛋白,为预防CHIKV感染及亚单位疫苗的研究奠定基础。方法根据Gen Bank上公布的CHIKV基因序列合成E2基因,并进行密码子优化,以提高原核表达效率。设计引物并以合成的E2基因为模板,PCR扩增CHIKV E2,连接到原核表达载体p ET-28a上,构建重组原核表达质粒p ET-28a-CHIKV E2,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定后进行纯化。结果重组原核表达质粒p ET-28a-CHIKV E2经双酶切鉴定构建正确,测序结果与原序列一致。表达的CHIKV E2融合蛋白相对分子质量约为47 000,可与His标签抗体特异性结合,纯化后纯度达95%以上。结论成功在大肠埃希菌中表达了CHIKV E2蛋白,纯化后蛋白纯度较高,为CHIKV亚单位疫苗的免疫试验奠定了基础。
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