| 核心链霉亲和素在毕赤酵母中的表达及纯化 |
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| 引用本文： | 訾静,张月娟,万一.核心链霉亲和素在毕赤酵母中的表达及纯化[J].粉末涂料与涂装,2018(5). |
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| 作者姓名： | 訾静 张月娟 万一 |
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| 作者单位： | 陕西省微生物研究所分子生物学研究中心 |
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| 摘 要： | 目的构建核心链霉亲和素(core-streptavidin,CSA)酵母表达载体,表达、纯化CSA蛋白,并测定其活性。方法通过基因操作获得天然SA的核心活性区域基因片段,克隆至酵母表达载体p PIC9K,重组表达质粒p PIC9K-CSA经电击转化至毕赤酵母KM71感受态细胞中,甲醇诱导表达CSA蛋白。利用硫酸铵沉淀、2-亚氨基生物素琼脂糖凝胶亲和层析法纯化CSA蛋白,紫外光谱测定法检测CSA蛋白与生物素的结合活性。结果构建的CSA基因工程菌能有效表达目的蛋白,经硫酸铵沉淀、亲和层析两步法纯化后得到纯度约95%的CSA重组蛋白,其具有与生物素结合的活性,活性为13.6 U/mg。结论利用毕赤酵母表达系统能够有效分泌表达CSA蛋白,该重组蛋白具有良好的生物学活性,为CSA发酵产品的大规模纯化提供了依据。
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| 关 键 词： | 核心链霉亲和素 毕赤酵母 表达 纯化 活性 |
Expression of core-streptavidin in Pichia pastoris and purification of expressed product |
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