Determination of ergosterol as a measure of fungal growth using Si 60 HPLC

Summary In order to determine to fungal growth ofFusarium graminearum 480, a method was developed for the extraction and estimation of ergosterol, a sterol specific for fungi. This method includes the direct saponification of bound ergosterol to fungal mycelia followed by n-hexane extraction and quantification using. High performance liquid chromatography (HPLC) with UV-detection. This procedure proved to be superior compared with other methods, since the yield of ergosterol yields was higher (up to 40%). n-Hexane extracts contained minor impurities which interfered with the UV-detection and the retention time of the compound was halved using Si 60 HPLC. The protein and ergosterol contents inF. graminearum cultures increased proportionally over a 3-week incubation period. The fungal formation of the mycotoxin zearalenone started at a level of 50 mg/kg ergosterol and increased rapidly in the stationary phase of growth, which was characterized by decreasing rates of ergosterol formation.

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Die Bestimmung von Ergosterin als Maß für Pilzwachstum unter Verwendung von Si 60 HPLC

Zusammenfassung Zur Erfassung des Pilzwachstums vonFusarium graminearum 480 wurde eine Methode der Extraktion und Messung des spezifischen Pilzsterins Ergosterin beschrieben. Diese Methode beruht auf einem direkten Verseifen des gebundenen Ergosterins im Pilzmycel, anschließender Extraktion mit n-Hexan und Quantifizierung mittels Si 60 HPLC und UV-Detektion. Verglichen mit den bisher bekannten Methoden liegen ihre Vorteile in der über 40% höheren Ergosterinausbeute, der geringeren die UV-Detektion störenden Verunreinigungen der n-Hexanextrakte und einer Halbierung der Retentionszeit der Verbindung durch Si 60 HPLC. Die Protein- und Ergosteringehalte von wachsendenF. graminearum-Kulturen waren über einen Zeitraum von 3 Wochen proportional. Die Bildung des Mykotoxins Zearalenon setztebei einer Ergosterinmenge von ca. 50 mg/kg ein und stieg bei Beginn der stationären Wachstumsphase, die durch eine geringere Ergosterinbildungsrate gekennzeichnet war, steil an.