| TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR检测克罗诺杆菌MMS基因方法的建立 |
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| 引用本文： | 谭翰清,蔡建生,谭海芳,林凤,程洁萍.TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR检测克罗诺杆菌MMS基因方法的建立[J].中国食品卫生杂志,2014,26(1):40-44. |
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| 作者姓名： | 谭翰清 蔡建生 谭海芳 林凤 程洁萍 |
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| 作者单位： | 广东省肇庆市疾病预防控制中心,广东 肇庆 526060;广东省肇庆市疾病预防控制中心,广东 肇庆 526060;广东省肇庆市疾病预防控制中心,广东 肇庆 526060;广东省肇庆市疾病预防控制中心,广东 肇庆 526060;广东省肇庆市疾病预防控制中心,广东 肇庆 526060 |
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| 基金项目： | 广东省肇庆市科技创新计划项目(2013E1810) |
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| 摘 要： | 建立克罗诺杆菌的特异、灵敏的TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR检测方法。方法 根据GenBank公布的克罗诺杆菌MMS基因高保守序列,设计特异引物和TaqMan-MGB探针,建立和优化反应体系,用25种其他常见致病菌评价反应体系的特异性,用克罗诺杆菌MMS基因重组质粒构建实时荧光定量PCR标准曲线,对重组质粒、纯菌和人工模拟污染样本进行灵敏度试验,并与FDA推荐的TaqMan探针实时荧光PCR比较,配对t检验分析两种方法对Ct值和荧光强度的差异。结果 采用TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR检测克罗诺杆菌MMS基因仅需40min,与25种非目标菌无交叉反应,仅对克罗诺杆菌有特异性扩增；所构建方法线性关系良好,相关系数r2=0.999,扩增效率为99.972%,对重组质粒、纯菌、人工模拟污染样品标本的灵敏度分别达10拷贝/反应、3.8和38cfu/ml；与FDA推荐的TaqMan探针实时荧光PCR相比,TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR的Ct值更小、△Rn值更高,灵敏度和分辨率差异均有统计学意义(Ct:t=-14.406,P﹤0.01；△Rn:t=14.230,P﹤0.01)。结论 本研究建立的TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR反应体系能够快速、特异、灵敏地检测克罗诺杆菌MMS基因,可用于婴幼儿奶粉中克罗诺杆菌的快速筛查和鉴定,具有较大的的应用价值和推广价值。
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| 关 键 词： | 克罗诺杆菌(原阪崎肠杆菌) 实时荧光定量PCR TaqMan-MGB探针 局部大分子合成操作子 MMS基因 食源性致病菌 食品安全 |
| 收稿时间： | 2013/9/22 0:00:00 |
Establishment of quantitative real-time PCR targeting the MMS gene of Cronobacter spp. based on TaqMan-MGB probe |
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| TAN Han-qing,CAI Jian-sheng,TAN Hai-fang,LIN Feng and CHENG Jie-ping.Establishment of quantitative real-time PCR targeting the MMS gene of Cronobacter spp. based on TaqMan-MGB probe[J].Chinese Journal of Food Hygiene,2014,26(1):40-44. |
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| Authors: | TAN Han-qing CAI Jian-sheng TAN Hai-fang LIN Feng and CHENG Jie-ping |
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| Affiliation: | Zhaoqing Center for Disease Control and Prevention,Guangdong Zhaoqing 526060,China;Zhaoqing Center for Disease Control and Prevention,Guangdong Zhaoqing 526060,China;Zhaoqing Center for Disease Control and Prevention,Guangdong Zhaoqing 526060,China;Zhaoqing Center for Disease Control and Prevention,Guangdong Zhaoqing 526060,China;Zhaoqing Center for Disease Control and Prevention,Guangdong Zhaoqing 526060,China |
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