| In-Fusion克隆技术构建HBV X基因真核表达质粒 |
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| 引用本文： | 王鹏,刘永兰,雷小英,郭瑞娟,向安,郭晏海. In-Fusion克隆技术构建HBV X基因真核表达质粒[J]. 现代仪器, 2014, 0(2) |
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| 作者姓名： | 王鹏 刘永兰 雷小英 郭瑞娟 向安 郭晏海 |
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| 作者单位： | 第四军医大学药学院学员二队;第四军医大学药学院药物基因组学教研室/全军基因诊断技术研究所; |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金面上项目(No:31271394) |
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| 摘 要： | 目的 :以血清中乙型肝炎病毒(HBV)DNA为模板,克隆构建HBV X蛋白质的真核表达载体pcDNA-HBx。方法 :设计扩增HBV X基因的In-Fusion PCR引物,采用高保真DNA聚合酶分两段扩增HBV X基因序列;采用In-Fusion克隆技术,将两段X基因扩增片段一步克隆入经Hind III和Xba I双酶切的pcDNA3.0真核表达载体,以构建重组真核表达载体pcDNA-HBX;采用Hind III和Xba I双酶切和DNA序列测序筛选鉴定重组载体;pcDNAHBx转染HepG2细胞,Western blot检测pcDNA-HBx转染细胞的HBx蛋白质表达。结果 :InFusion PCR引物分两段扩增获得全长HBx基因序列;In-Fusion获得克隆的pcDNA-HBx经双酶切筛选得到阳性重组质粒,测序分析证实插入序列正确;转染pcDNA-HBX的HepG2细胞,Western blot证实表达HBx蛋白质。结论 :以血清HBV DNA为模板克隆HBV X基因,构建了表达HBV HBx蛋白质的真核表达载体,为HBx蛋白质的生物学功能研究提供支持。
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| 关 键 词： | 乙型肝炎病毒 HBV X基因 基因克隆 表达载体 真核表达 |
Construction of HBV X gene eukaryotic expression plasmid by In-Fusion cloning technology |
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