| 重组hTRAIL腺病毒载体的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 杨芳,易山,李鸿钧,谢天宏,施锐,孙茂盛. 重组hTRAIL腺病毒载体的构建及鉴定[J]. 中国生物制品学杂志, 2007, 20(9): 637-641 |
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| 作者姓名： | 杨芳 易山 李鸿钧 谢天宏 施锐 孙茂盛 |
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| 作者单位： | 杨芳（中国医学科学院,中国协和医科大学,医学生物学研究所分子生物室,昆明,650118） 易山（中国医学科学院,中国协和医科大学,医学生物学研究所分子生物室,昆明,650118） 李鸿钧（中国医学科学院,中国协和医科大学,医学生物学研究所分子生物室,昆明,650118） 谢天宏（中国医学科学院,中国协和医科大学,医学生物学研究所分子生物室,昆明,650118） 施锐（中国医学科学院,中国协和医科大学,医学生物学研究所分子生物室,昆明,650118） 孙茂盛（中国医学科学院,中国协和医科大学,医学生物学研究所分子生物室,昆明,650118） |
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| 摘 要： | 目的构建表达hTRAIL基因的重组腺病毒载体。方法以重组质粒pThioHisA-TRAIL中提取的TRAIL基因为模板,采用PCR法扩增基因片段。将扩增的基因片段插入穿梭质粒pShuttle-CMV,并转化大肠肝菌DH5α。筛选重组质粒pShuttle-CMV-TRAIL,电转化已转化了pAdEasy-1的BJ5183细胞。筛选重组腺病毒质粒pAdEasy-TRAIL,用Lipofectamine转染293细胞,制备携带人全长TRAIL基因的重组复制缺陷型腺病毒(Ad-TRAIL)。氯化铯密度梯度离心法纯化Ad-TRAIL病毒颗粒,并测定病毒滴度。采用RT-PCR法检测TRAIL基因在293细胞中的转录。以Ad-TRAIL转染YTMLC细胞,采用免疫荧光法和流式细胞术检测TRAIL基因的表达。结果纯化后的Ad-TRAIL病毒颗粒数为2.77×1012VP/ml,感染性滴度为109.5(3.2×109)CCID50/ml。经RT-PCR扩增出约843bp的基因片段,与目的片段大小一致。流式细胞术和免疫荧光法均检测到TRAIL在YTMLC细胞中的表达,表达产物主要存在于细胞质中。结论已成功构建了表达hTRAIL重组腺病毒载体,为肿瘤的基因治疗提供了依据。
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| 关 键 词： | 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 重组腺病毒 基因治疗 构建 鉴定 |
| 文章编号： | 1004-5503（2007）09-637-05 |
| 收稿时间： | 2006-12-22 |
| 修稿时间： | 2006-12-22 |
Construction and Identification of Recombinant Adenovirus for Expression of hTRAIL |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | TNF-related apoptosis inducing ligand(TRAIL) Recombinant adenovirus Gene therapy Construction Identification |
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