miR- 29b通过抑制N2a细胞p53凋亡通路减轻氧糖剥夺/再灌注损伤

【摘要】 目的 探讨微小核糖核酸（miR）- 29b过表达是否抑制脑缺血损伤，进一步探讨其潜在机制。方法 体外培养小鼠成神经细胞瘤N2a细胞，构建氧糖剥夺/再灌注（OGD/R）模型，模拟体外脑缺血损伤。N2a细胞随机分为空白对照组、OGD/R组、OGD/R＋转染miR- 29b激动剂组、OGD/R＋转染miR- 29b抑制剂组、转染miR- 29b激动剂阴性对照组、转染miR- 29b抑制剂阴性对照组。实时定量聚合酶链反应（RT- qPCR）检测各组miR- 29b表达，溴化噻唑蓝四氮唑（MTT）比色法、乳酸脱氢酶（LDH）法检测 miR- 29b激动剂和抑制剂对OGD/R诱导细胞活性和凋亡的影响，Hoechst 33258染色法观察N2a细胞形态学特征及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶（caspase）- 3活性，免疫印迹法定量分析促凋亡蛋白Bax、Bcl- 2及p53表达。结果 经OGD/R处理的N2a细胞中miR- 29b水平明显降低。miR- 29b激动剂显著增加细胞活力，减少LDH漏出率，改善细胞核在凋亡过程中形态学变化，增强OGD/R条件下caspase- 3活性；miR- 29b抑制剂加剧OGD/R诱导的细胞毒性和细胞凋亡。miR- 29b激动剂阻断OGD/R诱导的Bax和p53蛋白表达增加，降低Bcl- 2蛋白表达；miR- 29b抑制剂加剧OGD/诱导的这些凋亡相关蛋白改变。p53基因敲除的p53 siRNA降低细胞活力，增加LDH漏出率，逆转miR- 29b激动剂对细胞损伤的改善作用。结论 miR- 29b通过负调控p53依赖性凋亡途径减轻脑缺血性损伤，可能为缺血性脑卒中提供一潜在的治疗靶点。

The potential mechanism of miR- 29b in reducing oxygen and glucose deprivation/reperfusion- induced injury through inhibiting the apoptotic pathway of N2a p53 cells