COL4A1在miR- 29b对N2B细胞氧糖剥夺/再灌注损伤保护作用中的调控机制研究

【摘要】 目的 通过构建N2B神经细胞氧糖剥夺（OGD）/再灌注（R）模型验证miR- 29b对神经细胞的保护作用，探讨Ⅳ型胶原蛋白基因α1（COL4A1）在miR- 29b对神经细胞OGD/R损伤保护作用中的调控机制。方法 正常和缺氧条件培养N2B细胞，实时定量聚合酶链反应（RT- qPCR）检测miR- 29b表达。细胞计数试剂盒（CCK）- 8、克隆形成、Hoechst实验，流式细胞术分别检测不同处理组细胞增殖、凋亡情况。免疫印迹双荧光素酶验证miR- 29b靶基因是否为COL4A1；N2B细胞转染miR- 29b mimics，RT- qPCR和免疫印迹检测COL4A1表达。构建COL4A1 3’非翻译区（UTR）野生型和突变型载体、靶基因，设计合成COL4A1，转染N2B细胞，缺氧培养，CCK- 8、克隆形成、Hoechst实验，流式细胞术检测不同处理组细胞增殖、凋亡情况。 结果 OGD/R细胞中miR- 29b表达较正常细胞组降低。在相同缺氧/复氧条件下培养细胞中miR- 29表达上调，细胞增殖能力明显增强，凋亡明显抑制。miR- 29b表达上调抑制COL4A1表达，但转染COL4A1及其对照组后，COL4A1对照组细胞增殖明显高于过表达组，凋亡明显低于过表达组。 结论 miR- 29b对N2B神经细胞OGD/R模型具有保护作用，通过抑制COL4A1表达减轻缺氧对N2B神经细胞的损伤。miR- 29b可通过调节COL4A1表达减少缺血/缺氧再灌注对神经细胞的损伤。

Regulation and control mechanism of COL4A1 in the protective effect of mir- 29b on oxygen glucose deprivation/reperfusion injury of N2B cells