海参铜锌超氧化物歧化酶原核表达载体的构建、表达及活性鉴定 |
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引用本文: | 车明月,穆贤,李学一,张齐,丛丽娜,牛庆昌,李成.海参铜锌超氧化物歧化酶原核表达载体的构建、表达及活性鉴定[J].大连工业大学学报,2018(1):5-9. |
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作者姓名: | 车明月 穆贤 李学一 张齐 丛丽娜 牛庆昌 李成 |
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作者单位: | 大连工业大学生物工程学院; |
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摘 要: | 采用原核宿主大肠杆菌BL21(DE3)成功表达了具有活性的仿刺参铜锌超氧化物歧化酶(Apostichopus japonicus Cu/Zn-superoxide dismutase,Aj-SOD1)蛋白。利用Trizol法从海参肠组织中提取总RNA,通过反转录PCR扩增获得Aj-SOD1基因的编码序列(GenBank:JX097096.1,459bp),构建克隆载体pMD18-Aj-SOD1;在目的基因两端引入(XhoⅠ/NdeⅠ)酶切位点,构建克隆载体pMD18-AjSOD1(XhoⅠ/NdeⅠ)。将此载体与表达质粒pET30a(+)分别双酶切后连接,构建重组表达载体pET30a-Aj-SOD1。转化至大肠杆菌BL21(DE3),Kan+抗性筛选阳性转化子,获得基因工程菌BL21(DE3)-pET30a-Aj-SOD1。SDS-PAGE和邻苯三酚自氧化法检测发现,经0.1 mmol/L IPTG诱导8h后,成功获得具有抗氧化活性的Aj-SOD1蛋白。
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关 键 词: | 仿刺参 铜锌超氧化物歧化酶 反转录PCR 抗氧化活性 |
Construction,expression and activity identification of Apostichopus japonicus Cu/Zn-superoxide dismutase in E.coli BL21(DE3) |
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