| 毕赤酵母分泌表达华根霉脂肪酶（r27RCLC）的糖基化鉴定 |
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| 引用本文： | 杨敏,喻晓蔚,吴厚军,徐岩.毕赤酵母分泌表达华根霉脂肪酶（r27RCLC）的糖基化鉴定[J].食品与生物技术学报,2014,33(10):1018-1024. |
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| 作者姓名： | 杨敏 喻晓蔚 吴厚军 徐岩 |
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| 作者单位： | 江南大学 工业生物技术教育部重点实验室,江苏无锡,214122 |
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| 基金项目： | 国家863计划项目，国家973计划项目，国家自然科学基金项目 |
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| 摘 要： | 研究了毕赤酵母GS115中能够高效分泌表达的华根霉脂肪酶(r27RCLC)的糖基化情况。运用糖基化抑制剂衣霉素处理表达目的蛋白的毕赤酵母细胞,通过SDS-PAGE比较分析经衣霉素处理后的脂肪酶r27RCLC分泌表达量的变化,结果显示酶的分泌表达受到很大的抑制,说明脂肪酶r27RCLC在表达时候很可能发生了糖基化,且糖基化对其有重要影响。通过生物化学方法,利用内切糖苷酶PNGase F和Endo Hf酶切处理脂肪酶r27RCLC,SDS-PAGE和Western Blot,结果显示r27RCLC未发生糖基化。将样品r27RCLC通过胰蛋白酶酶解等步骤处理,进行MADLI-TOF-MS质谱分析,结果发现MADLI-TOF-MS鉴定结果与内切糖苷酶酶切处理结果一致,进一步证明毕赤酵母分泌表达的华根霉脂肪酶r27RCLC未发生糖基化。
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| 关 键 词： | 毕赤酵母 华根霉脂肪酶 糖基化 MADLI-TOF-MS |
Glycosylation Identification of Rhizopus chinensis Lipase (r27RCLC) Expressed in Pichia pastoris |
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| YANG Min,YU Xiaowei,WU Houjun and XU Yan.Glycosylation Identification of Rhizopus chinensis Lipase (r27RCLC) Expressed in Pichia pastoris[J].Journal of Food Science and Biotechnology,2014,33(10):1018-1024. |
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| Authors: | YANG Min YU Xiaowei WU Houjun and XU Yan |
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| Affiliation: | YANG Min;YU Xiaowei;WU Houjun;XU Yan;Key Laboratory of Industrial Biotechnology,Ministry of Education,Jiangnan University; |
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| Abstract: | In this study, we identified the glycosylation situation of Rhizopus chinensis lipase CCTCC M201021 expressed in P. pastoris. At first, the yeast cells expressing lipase r27RCLC were treated with inhibitor tunicamycin and SDS-PAGE was conducted to analyze |
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| Keywords: | Pichia pastoris Rhizopus chinensis lipase MADLI-TOF-MS glycosylation |
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