| 溶菌酶LyAa在黑曲霉中的高效表达与酶学性质分析 |
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| 引用本文： | 顾力行,王斌,潘力. 溶菌酶LyAa在黑曲霉中的高效表达与酶学性质分析[J]. 现代食品科技, 2023, 39(1): 41-49 |
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| 作者姓名： | 顾力行 王斌 潘力 |
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| 作者单位： | （华南理工大学生物科学与工程学院，广东省发酵与酶工程重点实验室，广东广州 510006） |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划项目（2021YFC2100200） |
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| 摘 要： | 该研究探讨了将嗜碱顶孢霉中的GH25溶菌酶基因进行密码子优化后，构建包含糖化酶信号肽的溶菌酶单拷贝和双拷贝表达载体并均由启动子PnaⅡ控制表达，利用双拷贝表达载体和CRISPR/Cas9基因编辑工具，使用PEG介导法转化无孢黑曲霉宿主HL-1，获得高酶活力的溶菌酶表达菌株。重组菌株LyAa-C的溶菌酶活力达到2 291.37 U/mL，是仅使用双拷贝表达载体的LyAa-F菌株酶活力（869.74 U/mL）的2.63倍，是仅使用传统单拷贝表达载体的LyAa-T菌株酶活力（358.41 U/mL）的6.39倍。通过6×His标签使用镍柱亲和层析成功纯化了重组溶菌酶LyAa，并对其酶学性质进行了分析。溶菌酶LyAa蛋白大小约为25.0 ku，最适pH值为4.0，最适温度为30 ℃，并显示出良好的胃蛋白酶稳定性。综上，该研究基于双拷贝载体和CRISPR技术成功优化和提高了溶菌酶在黑曲霉中的表达。
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| 关 键 词： | 溶菌酶；黑曲霉；高效表达；酶学性质 |
| 收稿时间： | 2022-03-09 |
Efficient Expression and Enzymatic Characterization of Lysozyme LyAa in Aspergillus niger |
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| GU Lixing,WANG Bin,PAN Li. Efficient Expression and Enzymatic Characterization of Lysozyme LyAa in Aspergillus niger[J]. Modern Food Science & Technology, 2023, 39(1): 41-49 |
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| Authors: | GU Lixing WANG Bin PAN Li |
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| Affiliation: | (School of Biology and Biological Engineering, South China University of Technology, Guangdong Provincial Key Laboratory of Fermentation and Enzyme Engineering, Guangzhou 510006, China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | lysozyme Aspergillus niger high-level expression enzymatic characteristics |
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