| 靶向G偶联蛋白受体87基因shRNA重组表达质粒的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 鲁力文,李亚娟,李会,王方,钟梁,冯文莉. 靶向G偶联蛋白受体87基因shRNA重组表达质粒的构建及鉴定[J]. 中国生物制品学杂志, 2014, 0(1): 42-45 |
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| 作者姓名： | 鲁力文 李亚娟 李会 王方 钟梁 冯文莉 |
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| 作者单位： | 重庆医科大学临床血液学教研室临床检验诊断学教育部重点实验室 |
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| 摘 要： | 目的构建靶向G偶联蛋白受体(G protein-coupled receptor,GPR)87基因的shRNA重组表达质粒,并进行鉴定。方法根据NCBI基因数据库中的GPR87基因mRNA序列设计并合成3对靶向GPR87基因的shRNA,同时设阴性对照GPR87-HK序列,分别与线性化质粒pGenesil-1.1连接,构建靶向GPR87基因的shRNA重组表达质粒GPR87-1、GPR87-2、GPR87-3及GPR87-HK,在Lipofectamine 2000介导下,分别转染BIU87膀胱癌细胞,通过RTPCR和Western blot法检测各组细胞中GPR87基因mRNA转录和蛋白表达水平,并计算表达抑制率。结果 3种重组质粒经单酶切及测序鉴定,证明构建正确;转染BIU87膀胱癌细胞48 h后,镜下观察均可见绿色荧光;GPR87-1组、GPR87-2组和GPR87-3组细胞中GPR87基因和蛋白表达水平均显著低于GPR87-HK组(P0.01),mRNA表达抑制率分别为76%、52%和50%,蛋白表达抑制率分别为90%、45%和41%。结论成功构建了靶向GPR87基因的shRNA重组表达质粒,为后续研究GPR87基因对膀胱癌细胞的增殖、凋亡及耐药的影响奠定了基础。
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| 关 键 词： | G偶联蛋白受体 RNA干扰 膀胱癌 |
Construction and identification of shRNA plasmid targeting G protein-coupled receptor-87 gene |
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| LU Li-wen;LI Ya-juan;LI Hui;WANG Fang;ZHONG Liang;FENG Wen-li. Construction and identification of shRNA plasmid targeting G protein-coupled receptor-87 gene[J]. Chinese Journal of Bilogicals, 2014, 0(1): 42-45 |
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| Authors: | LU Li-wen LI Ya-juan LI Hui WANG Fang ZHONG Liang FENG Wen-li |
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| Affiliation: | LU Li-wen;LI Ya-juan;LI Hui;WANG Fang;ZHONG Liang;FENG Wen-li;Department of Clinical Hematology,Key Laboratory of Medical Diagnostics,Ministry of Education,Chongqing Medical University; |
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