| 不同片段HIV-1膜蛋白三聚体的构建、表达及其免疫原性 |
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| 引用本文： | 李勋,任丽,康延申,牛德云,郝彦玲,何彦平,邵一鸣,齐智.不同片段HIV-1膜蛋白三聚体的构建、表达及其免疫原性[J].粉末涂料与涂装,2014(2):145-150. |
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| 作者姓名： | 李勋 任丽 康延申 牛德云 郝彦玲 何彦平 邵一鸣 齐智 |
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| 作者单位： | 中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心 |
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| 基金项目： | 国家十二五科技重大专项-艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治-DNA疫苗(2012ZX10001008-012);传染病预防控制国家重点实验室留学归国人员项目资助(2012SKLID402) |
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| 摘 要： | 目的构建、表达不同片段1型人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)的膜蛋白三聚体,并检测其免疫原性。方法以中国主要流行株HIV-1CRF_07 BC亚型基因为模板构建pFUSE-gp160重组质粒,以pFUSE-gp160为模板构建pFUSE-gp140FF、pFUSE-gp120FF、pFUSE-gp41FF、pFUSE-N55FF、pFUSE-N28FF重组质粒,将重组质粒分别转染293F细胞,转染120 h后,收获上清,经Ni-NTA superflow、nProtein A SepharoseTM4 Fast Flow及Superose 12 Prep Grade分子筛纯化后,分别进行SDS-PAGE及Western blot鉴定。将各重组蛋白联合MF59佐剂经大腿肌肉注射免疫豚鼠,100μg/只,分别于第1、30及60天各免疫1次,初次免疫前7 d及末次免疫后第90天心脏采血,分离血清,ELISA法及假病毒系统分别检测血清特异性抗体效价及中和抗体滴度。结果质粒pFUSE-gp160、pFUSE-gp140FF、pFUSE-gp120FF、pFUSE-gp41FF、pFUSE-N55FF、pFUSE-N28FF经测序鉴定构建正确。各纯化蛋白的SDS-PAGE及Western blot鉴定均可见目的条带,gp120FF和gp140FF均可高通量表达,其表达量分别为6和2.5 mg/L,gp41FF、N55FF和N28FF蛋白的表达量均低于0.5 mg/L,纯化后的纯度均较高。gp140FF组和gp120FF组豚鼠血清抗体效价分别为3.2×105和5.33×105、中和抗体滴度分别为405和462,均显著高于其他组(P0.05)。结论 gp140FF和gp120FF能诱导豚鼠产生较强的体液免疫反应和中和抗体,本实验为HIV-1疫苗的研发提供了参考。
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| 关 键 词： | 1型人类免疫缺陷病毒 膜蛋白 三聚体 免疫原性 |
Construction,expression and immunogenicity of HIV-1 envelope glycoprotein trimers at various lengths |
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| LI Xun;REN Li;KANG Yan-shen;NIU De-yun;HAO Yan-ling;HE Yan-ping;SHAO Yi-ming;QI Zhi.Construction,expression and immunogenicity of HIV-1 envelope glycoprotein trimers at various lengths[J].Chinese Journal of Biologicals,2014(2):145-150. |
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| Authors: | LI Xun;REN Li;KANG Yan-shen;NIU De-yun;HAO Yan-ling;HE Yan-ping;SHAO Yi-ming;QI Zhi |
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| Affiliation: | LI Xun;REN Li;KANG Yan-shen;NIU De-yun;HAO Yan-ling;HE Yan-ping;SHAO Yi-ming;QI Zhi;National Center for AIDS/STD Control and Prevention,Chinese Center for Disease Control and Prevention; |
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| Abstract: | |
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