| 金黄色葡萄球菌GapC蛋白与鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白的融合表达及其活性 |
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| 引用本文： | 赵达,王鹤,梁宏儒,胡旭,姜东君,高佳滨,尹辉,陈为宏,乔波,朱战波.金黄色葡萄球菌GapC蛋白与鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白的融合表达及其活性[J].粉末涂料与涂装,2014(2):168-171,176. |
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| 作者姓名： | 赵达 王鹤 梁宏儒 胡旭 姜东君 高佳滨 尹辉 陈为宏 乔波 朱战波 |
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| 作者单位： | 黑龙江八一农垦大学动物科技学院 |
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| 基金项目： | 黑龙江省重大科技攻关项目(GA09B301-2) |
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| 摘 要： | 目的在大肠埃希菌中融合表达金黄色葡萄球菌(Staphylococcus.aureus,S.aureus)GapC蛋白与鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白,并检测其甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)活性。方法采用PCR技术分别扩增鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白flic基因和S.Aureus GapC基因,通过overlap PCR将这两段基因拼接并克隆至载体pQE30a,构建重组表达质粒pQE30-flic-GapC,将重组表达质粒转化E.coli XL-blue,IPTG诱导表达,表达产物经镍柱亲和层析试剂盒纯化后,进行SDS-PAGE及Western blot分析,并检测其GAPDH活性。结果重组表达质粒pQE30-flic-GapC经双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达产物相对分子质量约95 000,最佳诱导表达时间为5 h,主要以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的31.4%;纯化产物可与小鼠抗S.aureus全菌体多抗血清和抗鼠伤寒沙门菌全菌体多抗血清发生特异性反应,GAPDH活性为(0.337±0.019)。结论成功表达并纯化了具有较高生物学活性的flic-GapC融合蛋白,为S.aureus亚单位疫苗的研究奠定了基础。
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| 关 键 词： | 金黄色葡萄球菌 鼠伤寒沙门菌 GapC蛋白 鞭毛蛋白 融合蛋白 |
Fusion expression of GapC protein of Staphylococcus aureus and flagellin of Salmonella typhimurium and activity of expressed product |
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| ZHAO Da;WANG He;LIANG Hong-ru;HU Xu;JIANG Dong-jun;GAO Jia-bin;YIN Hui;CHEN Wei-hong;QIAO Bo;ZHU Zhan-bo.Fusion expression of GapC protein of Staphylococcus aureus and flagellin of Salmonella typhimurium and activity of expressed product[J].Chinese Journal of Biologicals,2014(2):168-171,176. |
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| Authors: | ZHAO Da;WANG He;LIANG Hong-ru;HU Xu;JIANG Dong-jun;GAO Jia-bin;YIN Hui;CHEN Wei-hong;QIAO Bo;ZHU Zhan-bo |
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| Affiliation: | ZHAO Da;WANG He;LIANG Hong-ru;HU Xu;JIANG Dong-jun;GAO Jia-bin;YIN Hui;CHEN Wei-hong;QIAO Bo;ZHU Zhan-bo;College of Animal Science and Veterinary Medicine,Heilongjiang Bayi Agricultural University; |
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