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| 抗真菌蛋白Rs-AFP2基因定点突变及其对大肠杆菌中表达的影响 | |
| 引用本文： | 朱建清,刘柱,胡新文,杨志荣.抗真菌蛋白Rs-AFP2基因定点突变及其对大肠杆菌中表达的影响[J].高技术通讯,2003,13(4):18-23. |
| 作者姓名： | 朱建清 刘柱 胡新文 杨志荣 |
| 作者单位： | 1. 四川大学生命科学学院,成都,610064;四川农业大学水稻研究所,温江,611130 2. 四川大学生命科学学院,成都,610064;中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室,海口,571101 3. 中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室,海口,571101 4. 四川大学生命科学学院,成都,610064 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金，39960065， |
| 摘 要： | 为了研究遗传密码子对表达调控的影响,利用PCR重叠延伸法,对萝卜抗真菌蛋白Rs-AFP2基因编码序列区的部分核苷酸进行沉默突变,构建突变体Rs-AFPm.序列分析表明,PCR产物全长240bp,有一个阅读框,编码的蛋白由29个氨基酸的信号肽和51个氨基酸的抗真菌蛋白组成.突变体与突变前的Rs-AFP2基因相比,在编码区第3号氨基酸Lys相差一个碱基(TTG→TTA),第5号氨基酸Gln相差一个碱基(CAG→CAA),第6号稀有密码子Arg相差两个碱基(CAG→CGA).重新合成引物,将切除信号肽的Rs-AFP2基因和Rs-AFPm基因与原核表达载体pET-21b(+)分别重组到大肠杆菌BL21菌株.IPTG诱导后,二者均得到了表达.软件分析显示,突变前pETAFPo表达产物占全菌蛋白的3%,突变后pETAFPm的表达产物占全菌蛋白含量的8%;表达蛋白主要以包涵体的形式存在,包涵体经超声波破碎后,蛋白质复性,抑菌结果表明,pETAFPm表达产物的抑菌半径大于pETAFP2表达产物的抑菌半径.这些都说明改造后的Rs-AFPm基因与Rs-AFP2基因相比,已有效地提高表达量. |
| 关 键 词： | 萝卜抗真菌蛋白(Rs-AFP2) 定点突变 密码偏爱性 表达 |
| 修稿时间： | 2002年9月16日 |
Sited-directed Mutagenesis of Raphanus Sativus-antifungal Protein2 (RS-AFP2) Gene and Its Effect on Expression in the E. Coli |
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| Zhu Jianqing,Liu Zhu,Hu Xinwen,Yang Zhirong.Sited-directed Mutagenesis of Raphanus Sativus-antifungal Protein2 (RS-AFP2) Gene and Its Effect on Expression in the E. Coli[J].High Technology Letters,2003,13(4):18-23. | |
| Authors: | Zhu Jianqing Liu Zhu Hu Xinwen Yang Zhirong |
| Abstract: | |
| Keywords: | Raphanus sativus-antifungal protein2 (Rs-AFP_2) Sited-directed mutagenesis Codon bias Expression |
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