| cp4-epsps基因在毕赤酵母中的表达及鉴定 |
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| 引用本文： | 赵慧,毛碧绮,梁治成,龚石娣. cp4-epsps基因在毕赤酵母中的表达及鉴定[J]. 现代食品科技, 2017, 33(11): 55-62 |
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| 作者姓名： | 赵慧 毛碧绮 梁治成 龚石娣 |
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| 作者单位： | （华南农业大学材料与能源学院，广东广州 510640）,（华南农业大学材料与能源学院，广东广州 510640）,（华南农业大学材料与能源学院，广东广州 510640）,（华南农业大学材料与能源学院，广东广州 510640） |
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| 基金项目： | 环保部公益性行业科研专项（201509044） |
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| 摘 要： | 为建立一种新的外源蛋白安全评估方法,构建转外源基因酵母是关键步骤。本研究以来源于转基因作物的抗除草剂合成酶蛋白CP4-EPSPS为研究模板,首先通过基因优化和化学合成获得cp4-epsps基因,优化后基因密码子适用性指数(CAI)为0.85,GC含量为52%。目的基因克隆至毕赤酵母表达载体p PICZb,经鉴定筛选正确的重组载体p PICZb-EPSPS电击转化至毕赤酵母GS115,cp4-epsps基因通过同源重组方式整合至酵母基因组,PCR扩增酵母基因组筛选得到在正确位点发生同源重组的4株阳性菌株。随后,各阳性菌株分别于28℃、250~300 r/min培养,0.5%甲醇诱导4 d后,提取各组菌株总蛋白,采用SDS-PAGE和western blotting鉴定CP4-EPSPS表达的正确性。CP4-EPSPS单克隆抗体及载体标签C-MYC单克隆抗体的western blotting结果一致显示cp4-epsps基因在毕赤酵母GS115中成功获得表达,大小约50 ku。本实验成功构建了转cp4-epsps基因的毕赤酵母基因工程菌,为下一步开展转基因作物CP4-EPSPS成份的安全评价奠定基础。
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| 关 键 词： | 转基因作物；外源蛋白；安全评价；cp4-epsps基因；毕赤酵母 |
| 收稿时间： | 2017-03-15 |
Expression and Identification of CP4-EPSPS Gene in Pichia pastoris |
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| ZHAO Hui,MAO Bi-qi,LIANG Zhi-cheng and GONG Shi-di. Expression and Identification of CP4-EPSPS Gene in Pichia pastoris[J]. Modern Food Science & Technology, 2017, 33(11): 55-62 |
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| Authors: | ZHAO Hui MAO Bi-qi LIANG Zhi-cheng GONG Shi-di |
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| Affiliation: | (College of Materials and Energy, South China Agricultural University, Guangzhou 510640, China),(College of Materials and Energy, South China Agricultural University, Guangzhou 510640, China),(College of Materials and Energy, South China Agricultural University, Guangzhou 510640, China) and (College of Materials and Energy, South China Agricultural University, Guangzhou 510640, China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Cp4-epsps gene Pichia pastoris transgenic ingredients safety assessment |
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