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猪圆环病毒3型微滴数字PCR定量检测方法的建立
引用本文:石磊,刘雨琦,李丽丽. 猪圆环病毒3型微滴数字PCR定量检测方法的建立[J]. 现代食品科技, 2019, 35(2): 232-237
作者姓名:石磊  刘雨琦  李丽丽
作者单位:暨南大学食品安全与营养研究院,广东广州,510632;暨南大学食品安全与营养研究院,广东广州,510632;暨南大学食品安全与营养研究院,广东广州,510632
基金项目:国家重点研发计划重点专项(2016YFD0500600);中央高校基本科研业务费项目(2017MS104;21618309);广东省科技计划项目(2017B020207004)
摘    要:猪圆环病毒3型是一种新型猪圆环病毒,可引起猪感染相关疾病。本实验根据猪圆环病毒3型的OPF2基因序列,设计引物探针,建立了可对其准确定量检测的微滴数字PCR(droplet digital PCR,dd PCR)方法。通过对dd PCR反应体系中的引物探针浓度和退火温度进行优化,得到dd PCR反应的最佳引物探针浓度比为800 nM:800 nM:400 nM;最佳退火温度为60℃。该dd PCR方法的标准曲线相关系数(R2)为0.999,呈良好的线性关系;灵敏度高,可达4.4 copies/μL;特异性良好,与常见猪病原无交叉反应。通过对临床样品的检测结果证明,本研究建立的猪圆环病毒3型dd PCR检测方法比实时荧光PCR检测方法的灵敏度高1个数量级,检测结果与荧光PCR定性结果一致,并且可对可疑样本进行定量分析。结果表明:新建立的dd PCR方法灵敏度高、特异性强,可用于猪圆环病毒3型的定量检测。

关 键 词:猪圆环病毒3型  微滴数字PCR  检测方法
收稿时间:2018-08-23

Development of Droplet Digital PCR for Quantitative Detection ofPorcine Circovirus Type 3
SHI Lei,LIU Yu-qi and LI Li-li. Development of Droplet Digital PCR for Quantitative Detection ofPorcine Circovirus Type 3[J]. Modern Food Science & Technology, 2019, 35(2): 232-237
Authors:SHI Lei  LIU Yu-qi  LI Li-li
Affiliation:(Institute of Food Safety and Nutrition, Jinan University, Guangzhou 510632, China),(Institute of Food Safety and Nutrition, Jinan University, Guangzhou 510632, China) and (Institute of Food Safety and Nutrition, Jinan University, Guangzhou 510632, China)
Abstract:
Keywords:porcine circovirus type 3   microdroplet digital PCR   detection
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