| 猪胸膜肺炎放线杆菌微滴数字PCR定量检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 石磊,刘雨琦,陈洵,叶蕾,常彦磊,李丽丽. 猪胸膜肺炎放线杆菌微滴数字PCR定量检测方法的建立[J]. 现代食品科技, 2019, 35(3): 212-217 |
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| 作者姓名： | 石磊 刘雨琦 陈洵 叶蕾 常彦磊 李丽丽 |
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| 作者单位： | 暨南大学食品安全与营养研究院,广东广州,510632;暨南大学食品安全与营养研究院,广东广州,510632;暨南大学食品安全与营养研究院,广东广州,510632;暨南大学食品安全与营养研究院,广东广州,510632;暨南大学食品安全与营养研究院,广东广州,510632;暨南大学食品安全与营养研究院,广东广州,510632 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划重点专项（2016YFD0500600）；广东省科技计划项目（2017B020207004）；中央高校基本科研业务费项目（2017MS104；21618309） |
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| 摘 要： | 为实现对猪胸膜肺炎的致病菌猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)的量化研究,本实验根据猪胸膜肺炎放线杆菌特异性基因ApxⅣ的保守序列,设计引物探针,通过优化反应条件,建立可对其准确定量的微滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度、稳定性以及适用性进行验证,与实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qPCR)检测方法进行比较分析。结果表明:ddPCR最佳退火温度为52℃;线性相关系数(R~2)为0.9957,线性关系良好;灵敏度达153.8copies/μL,是qPCR的两倍;特异性良好,与其它常见猪病原无交叉反应。在实际样品检测中,110份样品的ddPCR与qPCR检测结果的Kappa系数为0.9529,说明两种检测方法结果高度一致,并且ddPCR可对qPCR无法判断阴阳性的可疑样本进行定量分析。本实验建立的ddPCR方法敏感性高、特异性强、可用于猪胸膜肺炎放线杆菌的定量检测。
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| 关 键 词： | 猪胸膜肺炎放线杆菌 微滴数字PCR 检测方法 |
| 收稿时间： | 2018-09-28 |
Development of Droplet Digital PCR for the Quantitative Detection of Actinobacillus pleuropneumoniae |
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| SHI Lei,LIU Yu-qi,CHEN Xun,YE Lei,CHANG Yan-lei and LI Li-li. Development of Droplet Digital PCR for the Quantitative Detection of Actinobacillus pleuropneumoniae[J]. Modern Food Science & Technology, 2019, 35(3): 212-217 |
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| Authors: | SHI Lei LIU Yu-qi CHEN Xun YE Lei CHANG Yan-lei LI Li-li |
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| Affiliation: | (Institute of Food Safety and Nutrition Jinan University, Guangzhou 510632, China),(Institute of Food Safety and Nutrition Jinan University, Guangzhou 510632, China),(Institute of Food Safety and Nutrition Jinan University, Guangzhou 510632, China),(Institute of Food Safety and Nutrition Jinan University, Guangzhou 510632, China),(Institute of Food Safety and Nutrition Jinan University, Guangzhou 510632, China) and (Institute of Food Safety and Nutrition Jinan University, Guangzhou 510632, China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Actinobacillus pleuropneumoniae droplet digital PCR detection method |
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